圓錐繡球提取物總香豆素苷治療急慢性腎損傷的藥效和作用機(jī)制研究.pdf

1、隨著老齡化的到來，腎臟疾病的發(fā)病率在逐年上升，無論是感染或腎毒性藥物導(dǎo)致的急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)，還是慢性免疫性腎病，都嚴(yán)重威脅著中國人民的健康，然而當(dāng)前并沒有太多有效的藥物來治療此類疾病?；谥袊耖g用藥經(jīng)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室前期的工作基礎(chǔ)，初步發(fā)現(xiàn)廣泛分布于中國南方的植物圓錐繡球（Hydangea paniculata）莖提取物(簡稱HP)有保護(hù)腎臟的藥理活性。因此，本實(shí)驗(yàn)中，通過LPS誘發(fā)的膿毒性免疫腎

2、損傷、順鉑誘發(fā)的急性腎損傷和cationozed-BSA(c-BSA，陽離子白蛋白)誘發(fā)的免疫性腎病模型，系統(tǒng)性的評價HP對腎臟保護(hù)作用的藥效。同時通過體內(nèi)和體外的方法，深入研究HP腎臟保護(hù)作用的分子機(jī)制。
　　研究發(fā)現(xiàn)HP對三種腎病模型均展現(xiàn)出良好的治療效果，分述如下:
　　1.HP顯著降低了LPS誘發(fā)的AKI小鼠血中尿素氮（blood urine nitrogen，BUN）和中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白（neutroph

3、il gelatinase-associated lpocalin，NGAL）的表達(dá)，減輕腎臟病理損傷。研究發(fā)現(xiàn)HP可以顯著減輕LPS誘導(dǎo)的腎臟組織中氧化應(yīng)激和炎癥因子的表達(dá)，減少炎性細(xì)胞對腎臟組織的侵潤，以及減輕腎小管細(xì)胞凋亡。Western blot表明HP對調(diào)亡相關(guān)caspase家族中caspase3和caspase7的剪切激活也有顯著抑制作用。體外和體內(nèi)分子生物學(xué)研究表明HP可以顯著抑制LPS刺激下巨噬細(xì)胞Ana1中NFκB的表

4、達(dá)和核轉(zhuǎn)位，抑制Ana1細(xì)胞中STAT3的磷酸化;HP對LPS刺激的人腎小管上皮細(xì)胞HK2中STAT1和ERK1/2的磷酸化有顯著抑制作用，提示這可能是HP發(fā)揮抗炎免疫所依賴的信號通路。
　　2.HP顯著降低了腹腔注射順鉑導(dǎo)致的小鼠血中尿素氮和血肌酐(serum ereatinine，SCr)的上升，降低了腎臟指數(shù)，病理觀察表明HP減輕了小鼠腎臟組織中腎小管的凋亡和壞死，以及管型的形成。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，HP顯著降低了順鉑導(dǎo)致的腎臟組

5、織氧化應(yīng)激，抑制了炎癥因子TNFα和IL-1β的表達(dá)，對觸發(fā)凋亡的關(guān)鍵因子FasL也有顯著降低作用。HP顯著抑制了caspase3和caspase7的剪接激活，增強(qiáng)了BCL2的表達(dá)。免疫熒光證明HP顯著降低了巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對腎臟組織的侵潤;分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)表明其作用機(jī)制同HP抑制順鉑誘導(dǎo)的STAT3和ERK1/2的磷酸化相關(guān)。
　　3.HP顯著改善了c-BSA誘導(dǎo)的免疫性腎病大鼠的腎功能，在給藥的不同時間點(diǎn)，均顯著降低了腎病大

6、鼠的BUN和SCr，增加肌酐清除率，同時降低了免疫性腎病引起的血中甘油三酯(triglyceride，TG)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipid protein-cholesterol，LDL-C)的升高。病理檢測證實(shí)HP顯著改善了腎小球硬化、系膜增生、腎間質(zhì)炎性細(xì)胞侵潤、空泡變性和蛋白管型等病理特征。
　　在對HP進(jìn)行詳細(xì)的藥效學(xué)和機(jī)制研究外，還對HP進(jìn)行了初步的藥代動力學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HP中主要成分茵芋苷(

7、skimmin)口服生物利用度為14.2％，同時HP中的香豆素類化合物可以在體內(nèi)代謝成血藥濃度相對較高的7-羥基香豆素和6，7-二羥基香豆素，它們被報道也具有比較強(qiáng)的抗炎和抗氧化活性，為理解HP的體內(nèi)藥效提供了一定的物質(zhì)基礎(chǔ)。初步的單次給藥急性毒性試驗(yàn)證明HP具有一定的安全性。
　　綜上，圓錐繡球作為一個新的藥用資源，對其進(jìn)行較為系統(tǒng)的腎保護(hù)作用研究，具有一定的創(chuàng)新性。HP作為一個中藥5類藥物，處于臨床前開發(fā)階段，通過兩種急性腎病