雷公藤紅素對P物質(zhì)致敏肥大細胞中PI3K-AKT-GSK3β信號通路的影響.pdf

1、目的：以經(jīng)P物質(zhì)致敏的肥大細胞瘤細胞P815為模型，檢測雷公藤紅素對其細胞活性的影響，并分析PI3K/AKT/GSK3β通路上關(guān)鍵基因和蛋白表達量變化，從而為深入揭示雷公藤紅素在抗炎和抗過敏中的分子機制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：以肥大細胞瘤細胞P815為研究對象，通過基于CCK8方法的細胞活力檢測，確定最佳的P物質(zhì)處理濃度和時間，構(gòu)建致敏模型;采用同樣的方法，篩選出合適的雷公藤紅素處理濃度和時間。在此基礎(chǔ)上，檢測不同濃度和時間的雷公藤

2、紅素干預對致敏細胞活性的影響。以無雷公藤處理的P物質(zhì)模型組為對照，采用qPCR法檢測雷公藤紅素干預組中PI3K/AKT/GSK3β信號通路的主要基因的相對表達量;同時采用流式細胞術(shù)檢測該信號通路關(guān)鍵蛋白AKT2和GSK3β的表達。
　　結(jié)果：⑴對于單純的P物質(zhì)處理組，在50-150μM處理濃度下，細胞存活率隨時間增加而下降;其中100μM處理1h后細胞的存活率即降低為51.58％，確定為最佳的致敏條件。對于單純的雷公藤紅素組，當干

3、預濃度超過2.5μM、時間超過1h后，細胞存活率明顯隨濃度增加和/或時間延長而降低;而濃度在2μM、時間在1h內(nèi)，細胞存活率未受明顯影響(P＞0.05)，因此是雷公藤紅素的合適干預條件范圍。⑵選擇100μM P物質(zhì)致敏造模，并采用1.5μM、2.0μM、2.5μM的雷公藤紅素分別干預0.5h、1.0h和1.5h;中劑量即2.0μM組雷公藤組干預后細胞存活率分別變成91.90％(0.5h)、83.51％(1.0h)和82.4％(1.5h)

4、，均顯著高于對應的P物質(zhì)組(P＜0.05)，證明在此濃度下具有良好的干預發(fā)揮效應。⑶選擇2.0μM雷公藤紅素干預0.5h體系，與無雷公藤干預組即P物質(zhì)模型組相比，該干預組中Ccl24、Gnai1、Pik3r3、Akt2、Fgr、 Arrb2基因的相對表達量均有不同程度的顯著下降(P＜0.05); Adrbk2、Gsk3β、Ccr6基因的相對表達量則均呈現(xiàn)一定程度的顯著上升(P＜0.05)，表明此雷公藤紅素干預會影響致敏肥大細胞中PI3K