多疣狹口蛙皮膚分泌物分析及其在繁殖生理中的作用.pdf

1、兩棲類屬于一類可持續(xù)利用的自然資源。由于長(zhǎng)期進(jìn)化，使得具有復(fù)雜多樣生態(tài)類型的兩棲類有了廣泛的生態(tài)適應(yīng)性，以及形態(tài)、生理、生化和行為的多樣性。在適應(yīng)和進(jìn)化的過(guò)程中，兩棲類皮膚分泌液中含有的生物活性分子具有特殊分子結(jié)構(gòu)，且功能亦復(fù)雜多樣。已有幾百種的生物活性分子從兩棲類的皮膚分泌液中分離獲得，并對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和功能的研究。兩棲動(dòng)物皮膚分泌物中由于貯存有不同生理和藥理活性的生物活性多肽，在動(dòng)物藥物的開發(fā)上尤為備受關(guān)注。如果在動(dòng)物體內(nèi)能找到較有

2、效的可提高和控制動(dòng)物繁殖性能的生物活性物質(zhì)，并了解其結(jié)構(gòu)、功能、藥理作用及其應(yīng)用對(duì)象和方法，將為解決野生動(dòng)物的養(yǎng)殖和繁育的許多困難提供物質(zhì)和技術(shù)的支持。就此，本文通過(guò)對(duì)兩棲動(dòng)物皮膚結(jié)構(gòu)及皮膚分泌物的分離純化，作用機(jī)理，以及在不同繁殖期皮膚分泌物中對(duì)其繁殖生理的作用等方面的研究工作，為進(jìn)一步深入研究其分泌物所含有的促繁殖活性物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)以及功能特性提供基礎(chǔ)依據(jù)，同時(shí)為今后兩棲類動(dòng)物繁殖生理調(diào)節(jié)，人工飼養(yǎng)和繁殖能力的提高等提供基礎(chǔ)資料。

3、r>　　 據(jù)觀察發(fā)現(xiàn)多疣狹口蛙(Kaloula verrucosa)無(wú)論雌雄，其皮膚分泌物比其他的蛙類要多，尤其是背部皮膚更為明顯；在蛙的繁殖前期，繁殖期較繁殖后期更容易分泌。其雌體在抱對(duì)前就有較多分泌物產(chǎn)生，在抱對(duì)期間及抱對(duì)后都有不同量分泌物產(chǎn)生，而且雌雄成體并非一抱對(duì)就排卵、受精。我們推測(cè)在此過(guò)程中，雌性和雄性的皮膚分泌物可能有兩個(gè)作用，一是加固雄性抱住雌性，二是由于激素的傳遞或信息的交流，使雌雄繁殖同步。由此推測(cè)它們的皮膚分泌物

4、在發(fā)情、抱對(duì)、排卵及交配中可能會(huì)起到一定的作用，并且在整個(gè)繁殖過(guò)程中其皮膚分泌物中某些物質(zhì)的量和成分可能會(huì)有變化。
　　 為了解不同繁殖時(shí)期多疣狹口蛙皮膚分泌物的分泌與皮膚結(jié)構(gòu)的關(guān)系及多疣狹口蛙與其它蛙類皮膚結(jié)構(gòu)的差異，本研究分別對(duì)多疣狹口蛙不同繁殖時(shí)期，非繁殖期的黑斑蛙、昭覺(jué)林蛙的皮膚顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察比較。從皮膚顯微結(jié)構(gòu)觀察表明：多疣狹口蛙三個(gè)不同繁殖時(shí)期皮膚結(jié)構(gòu)無(wú)變化，其背部腺體要比腹部發(fā)達(dá)。尤其是顆粒腺，比腹部豐富。背部

5、皮膚的色素層也比腹部發(fā)達(dá)。繁殖前期、繁殖中期粘液腺含量比繁殖后期略微多。而對(duì)三種蛙皮膚顯微結(jié)構(gòu)的對(duì)比顯示：多疣狹口蛙皮膚比昭覺(jué)林蛙及黑斑蛙皮膚含有更多的腺體，尤其是顆粒腺比后兩者含量更為豐富，并且在皮下存在許多腺體團(tuán)，背腹皮膚較后兩者厚。昭覺(jué)林蛙皮膚較黑斑蛙的含有更爹的顆粒腺和粘液腺。三種蛙的背部皮膚都含有色素細(xì)胞，除了在多疣狹口蛙雌性腹部觀察到少量色素細(xì)胞外，另兩種蛙在腹部皮膚中均未見色素層。相比之下，昭覺(jué)林蛙和黑斑蛙皮膚結(jié)構(gòu)較相似，

6、兩者同多疣狹口蛙在皮膚腺體分布及數(shù)量上差別較大，這也體現(xiàn)了三者不同的生態(tài)適應(yīng)機(jī)制。。另外應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳，葡聚糖凝膠層析，酶聯(lián)免疫等實(shí)驗(yàn)方法對(duì)多疣狹口蛙繁殖前、繁殖期、繁殖后三個(gè)生理時(shí)期的皮膚分泌物進(jìn)行了初步的成分分離，以及主要對(duì)其不同時(shí)期皮膚分泌物及分離成分中FSH及LH進(jìn)行了免疫檢測(cè)和定量比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：多疣狹口蛙皮膚分泌物中FSH的量在其繁殖前期處于三個(gè)時(shí)期中的最高水平，繁殖期有所下降，而繁殖后期降至最低。對(duì)LH而言，則

7、是在繁殖期含量最高，在繁殖前期含量略微偏低，同樣是到繁殖后期含量最低。這和其它動(dòng)物不同繁殖時(shí)期此兩種激素出現(xiàn)峰的高低是吻合的，符合這兩種激素的生理作用。同時(shí)結(jié)果顯示多疣狹口蛙皮膚分泌物中FSH(28KDa)和LH(29KDa)的分子量與其它物種的差異不大。
　　 最后將多疣狹口蛙不同濃度的皮膚分泌物作用于小鼠。從其繁殖活動(dòng)及發(fā)情狀況的觀察結(jié)果來(lái)看，稀釋8倍的雄性多疣狹口蛙繁殖前期和繁殖中期的皮膚分泌物對(duì)小鼠存在促進(jìn)發(fā)情的作用，而