蛙皮分泌物中天然生物活性肽的制備及結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、傳統(tǒng)抗生素的頻繁使用導(dǎo)致抗生素耐藥菌株迅速增加，人類健康受到威脅。兩棲類活性肽因?yàn)榫哂锌咕鼓[瘤，免疫調(diào)節(jié)且不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)使其成為相關(guān)研究的熱點(diǎn)。兩棲類皮膚分泌物中富含多種生物活性肽，其中抗菌肽因?yàn)槠涮厥獾淖饔冒悬c(diǎn)，不易使細(xì)菌和腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，而成為最有前途的新型抗生素和抗腫瘤藥物。
　　 中國林蛙(Rana chensinensis)是中國東北特有的蛙種，像其它兩棲類動(dòng)物一樣，中國林蛙在長期適應(yīng)潮濕及復(fù)雜的生活環(huán)境

2、中，其皮膚成為天然免疫系統(tǒng)的重要器官。在應(yīng)對(duì)各種微生物的過程中，中國林蛙皮膚可以分泌大量生物活性多肽，這些活性肽種類豐富，結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，對(duì)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都有抑制效果。本研究以中國林蛙為材料采用電刺激法獲得中國林蛙皮膚分泌物，用制備型反相高效液相色譜對(duì)其進(jìn)行純化，得到F18，F(xiàn)24，F(xiàn)28，F(xiàn)30，F(xiàn)31，F(xiàn)34，F(xiàn)36，F(xiàn)37，F(xiàn)40，F(xiàn)43，F(xiàn)46，F(xiàn)49，F(xiàn)50，F(xiàn)55，F(xiàn)57，F(xiàn)58，F(xiàn)60，F(xiàn)62，F(xiàn)66，F(xiàn)70共2

3、0個(gè)組分；對(duì)這20各組分分別進(jìn)行初步活性篩選，得到F40，F(xiàn)43，F(xiàn)46，F(xiàn)49，F(xiàn)50，F(xiàn)57，F(xiàn)60，F(xiàn)62，F(xiàn)66，共9個(gè)具有活性組分，進(jìn)一步用分析型反相高效液相色譜純化，得到F46，F(xiàn)49，F(xiàn)57，F(xiàn)60四個(gè)樣品。利用MALDI-TOF/TOF MS和Q-TOF/TOF MS對(duì)這四個(gè)組分進(jìn)行一級(jí)結(jié)構(gòu)測定，得到生物活性肽的分子量范圍是566-3699Da，最短的肽含有5個(gè)氨基酸，最長的由37個(gè)氨基酸組成。在此基礎(chǔ)上我們利用生物信息