ETV1調(diào)控因子CBP-p300在胃腸道間質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　胃腸道間質(zhì)瘤是最常見的間質(zhì)源性的消化道腫瘤，該腫瘤主要分子特點(diǎn)是存在能夠異常激活KIT與PDGFRA的基因突變。雖然病例的總體生存率隨著酪氨酸激酶抑制劑的問(wèn)世得到了很大的改善，但由于治療過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生KIT或PDGFRA的繼發(fā)性突變，大多數(shù)病例最終仍然會(huì)發(fā)展到耐藥階段，造成病情的惡化。近來(lái)的研究表明，組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶（histone acetyltransferase，HAT）CBP及p300的功能與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展

2、密切相關(guān)，而應(yīng)用針對(duì)CBP和p300的靶向小分子抑制劑則可以抑制某些實(shí)體瘤細(xì)胞的增殖并且誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外，另有報(bào)道顯示，CBP/p300可以在體外細(xì)胞模型中直接作用于一種轉(zhuǎn)錄因子ETV1，通過(guò)催化ETV1的乙?；瘡亩龠M(jìn)其的轉(zhuǎn)錄活性;而在GIST組織中，ETV1則有著特異性的表達(dá)，并且被認(rèn)為是一種與GIST生存相關(guān)的特殊因子。因此，轉(zhuǎn)錄后乙?；揎椩贕IST起源與成瘤過(guò)程中的潛在作用已逐漸受到重視。
　　目的：
　

3、　明確ETV1在GIST組織與細(xì)胞中的表達(dá)特征及潛在生物學(xué)作用，進(jìn)而探究其調(diào)控因子CBP/p300在GISTs成瘤和腫瘤細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用，并評(píng)估它們?cè)贕IST靶向治療中的應(yīng)用前景。對(duì)選擇性CBP/p300抑制劑C646的潛在治療作用進(jìn)了探索，并對(duì)具體的分子機(jī)制進(jìn)行了深入的研究。
　　方法：
　　通過(guò)向GIST細(xì)胞轉(zhuǎn)染特異的小干擾RNA序列從而下調(diào)細(xì)胞中的ETV1、CBP以及p300的表達(dá)。GIST腫瘤以及瘤旁組織中的c-

4、Kit與ETV1的表達(dá)由免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)。用濃度遞增的C646對(duì)腫瘤細(xì)胞GIST882進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)置了與低濃度的伊馬替尼聯(lián)合用藥組。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及Western blot分析技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染小干擾RNA后ETV1、CBP和p300分別在mRNA水平及蛋白水平的表達(dá)情況。
　　GIST細(xì)胞的細(xì)胞活力由CCK-8分析法來(lái)測(cè)定。細(xì)胞凋亡的檢測(cè)則由caspase活性分析以及AnnexinⅤ/PI染色后的流式細(xì)胞儀分析完成

5、。腫瘤細(xì)胞經(jīng)PI單染后由流式細(xì)胞儀分析以檢測(cè)細(xì)胞周期改變。與這些細(xì)胞生物學(xué)活性及功能變化相關(guān)的信號(hào)通路的分子改變是由Western blot技術(shù)檢測(cè)分析的。
　　結(jié)果：
　　GIST組織和細(xì)胞(GIST882)中均有ETV1的特征性表達(dá)，而下調(diào)GIST細(xì)胞的ETV1表達(dá)則將抑制腫瘤細(xì)胞的增殖并且誘發(fā)細(xì)胞凋亡。在轉(zhuǎn)錄水平上抑制CBP的表達(dá)可以阻止GIST882的細(xì)胞增殖，而p300的表達(dá)下調(diào)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖無(wú)明顯抑制作用。干擾C

6、BP與p300的表達(dá)均能激活腫瘤細(xì)胞的caspase活性，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。GIST細(xì)胞的CBP以及p300的表達(dá)下調(diào)后，ETV1的表達(dá)下降，KIT的磷酸化受到抑制，并且均能通過(guò)激活線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。CBP表達(dá)下調(diào)會(huì)導(dǎo)致增殖相關(guān)的ERK1/2失活并伴隨JNK的磷酸化水平上調(diào)，而在p300干擾組中并未觀察到上述信號(hào)通路的功能改變，因此與p300相比，CBP在腫瘤細(xì)胞的增殖和生存過(guò)程中起到了更為重要的作用。應(yīng)用CBP/p300的選

7、擇性抑制劑C646可以有效抑制GIST細(xì)胞的增殖。經(jīng)過(guò)C646的處理后，腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期阻滯，表明細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)以及細(xì)胞周期的阻滯能夠促進(jìn)增殖抑制作用。此外，與CBP干擾組的結(jié)果類似，C646可以通過(guò)抑制KIT的激活進(jìn)而阻斷下游信號(hào)通路激活與轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　結(jié)論：
　　下調(diào)GIST細(xì)胞中的CBP可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞活力，而干擾p300表達(dá)并不能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。因此，與p300相比， CBP是更

8、具靶向優(yōu)勢(shì)的治療靶點(diǎn)。引起上述的GIST腫瘤抑制作用的分子機(jī)制涉及ETV1表達(dá)的下調(diào)、腫瘤細(xì)胞增殖相關(guān)的KIT及其下游效應(yīng)因子ERK1/2和Akt的功能失活、JNK以及線粒體凋亡途徑的參與等。選擇性乙?；D(zhuǎn)移酶抑制劑C646可以抑制GIST細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這種作用主要是通過(guò)抑制CBP的功能而實(shí)現(xiàn)的。綜上所述，對(duì)于GIST分子治療而言，CBP是更具靶向優(yōu)勢(shì)的潛在治療靶點(diǎn)，而應(yīng)用選擇性組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶抑制劑則有望成為今后靶向治療