激動型CD40單克隆抗體體外抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討激動型CD40單克隆抗體（CD40monoclonal antibody，CD40mAb）體外對負(fù)載腫瘤抗原的樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）激活情況，進(jìn)而研究DCs誘導(dǎo)活化的腫瘤特異性效應(yīng)T淋巴細(xì)胞對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116增殖的抑制作用。
　　方法：應(yīng)用反復(fù)凍融法制備腫瘤抗原，密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞（PBMCs），貼壁培養(yǎng)分離DCs前體細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，體外rhGM-CSF和rhIL-

2、4聯(lián)合誘導(dǎo)DCs前體細(xì)胞定向分化成未成熟的DCs后予腫瘤抗原負(fù)載，在不同條件下激活促進(jìn)其成熟，不同實(shí)驗(yàn)條件分組為：空白陰性對照組、陽性對照TNF-α組和激動型 CD40mAb組，不同條件處理后應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測激活后各組DCs表面分子表達(dá)情況，ELISA檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子IL-12(p70)分泌情況；進(jìn)而將各組DCs分別與T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤特異性效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，MTT法檢測DCs誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化增殖能力；將

3、不同條件誘導(dǎo)產(chǎn)生的腫瘤特異性效應(yīng)T淋巴細(xì)胞分別與結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT116混合培養(yǎng)， MTT法檢測效應(yīng)T淋巴細(xì)胞對HCT116細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　結(jié)果：成功制備可溶性腫瘤凍融抗原，濃度為2.01mg/ml；從PBMCs中可以分離獲得DCs前體細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞；激動型CD40mAb激活的負(fù)載腫瘤抗原DCs表面分子 CD80（92.5％±6.7%）、CD83（22.4%±5.3%）、CD86（81.3%±7.5%）和 HLA-DR

4、（87.8%±3.7%）的表達(dá)率及細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 IL-12（p70）分泌濃度（716.80±53.43pg/ml）明顯高于空白陰性對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與陽性對照TNF-α組相比無明顯差異（P＞0.05）；激動型CD40mAb組DCs誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化增殖后測得刺激指數(shù)（SI）為2.0062±0.4383顯著高于空白陰性對照組（1.3650±0.2098），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與陽性對照 TNF

5、-α組（1.9778±0.3704）相比無明顯差異（P＞0.05）；激動型 CD40mAb激活的DCs所誘導(dǎo)的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞對結(jié)腸癌細(xì)胞的殺傷率為66.08%±0.41%，明顯高于空白陰性對照組（46.60%±1.10%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與陽性對照TNF-α組（66.21%±1.73%）相比無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、激動型CD40mAb在體外可以更好的激活負(fù)載腫瘤抗原的DCs并促