從生化水平探討MC-RR及藍(lán)藻水華粗提物經(jīng)口染毒對(duì)小鼠肝臟的毒性效應(yīng).pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文從生化水平探討MCRR及藍(lán)藻水華粗提物經(jīng)口染毒對(duì)小鼠肝臟的毒性效應(yīng)姓名：黃樸申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：勞動(dòng)衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師：徐立紅20090501浙江大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要體途徑可能是MC誘導(dǎo)凋亡的主要通路。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑是近年才被證明的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路，由過度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起。當(dāng)多種因素引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生，且強(qiáng)度超過細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自穩(wěn)定范圍時(shí)，細(xì)胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路被開啟目前關(guān)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路是否參與MC誘導(dǎo)

2、的細(xì)胞凋亡還未見報(bào)道。MC家族成員眾多，各個(gè)成員由于結(jié)構(gòu)的不同，其毒性作用及致毒機(jī)制存在差異。MC—RR是藍(lán)藻藻水華釋放到水體中主要MC之一，其對(duì)生物的毒性作用不可忽視，但目前在活體水平對(duì)其經(jīng)口途徑的毒性研究，尤其在哺乳動(dòng)物中的報(bào)道還不多。此外，生活在藍(lán)藻水體爆發(fā)水體中生物，并非處于單一毒素的暴露之中，水華釋放到水體中的眾多有害成分對(duì)它們有著復(fù)雜的毒性作用。基于此，本研究對(duì)MC家族中的重要成員MC—RR以及藍(lán)藻水華粗提物經(jīng)口途徑暴露的毒

3、性作用及致毒機(jī)制進(jìn)行了探討。本研究中，MC—RR和藍(lán)藻水華粗提物分別以46，23，46，93，1861tg／kg和46，23，46，93119／kgMC(RRLR)的劑量經(jīng)灌胃方式連續(xù)7天染毒小鼠，第八天處死小鼠后摘取肝臟對(duì)MCRR和藍(lán)藻水華粗提物對(duì)肝臟的毒性作用及其凋亡機(jī)制進(jìn)行研究：采用TUNEL法測(cè)定MCRR誘導(dǎo)肝組織細(xì)胞的凋亡率，通過檢測(cè)各種凋亡相關(guān)(蛋白因子)在染毒小鼠肝臟中的表達(dá)或活性變化來探究它們?cè)诩?xì)胞凋亡過程中的作用，包括

4、用普通顯微鏡直接觀察MCRR染毒后小鼠肝組織HE染色的結(jié)構(gòu)變化，通過ROS底物DCFH—DA測(cè)定染毒后小鼠肝臟ROS的改變，通過測(cè)定MDA的含量來檢測(cè)毒素暴露小鼠脂質(zhì)過氧化程度，用ealpain和PP2A活性檢測(cè)試劑盒測(cè)定MCRR染毒小鼠肝組織calpmn和PP2A酶活性的變化，用免疫印跡法(westernblot)檢測(cè)PP2AA和C亞基、Bax、Bcl2、p53、HSP70以及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78和CHOP的表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)