新型疫苗佐劑低分子量肝素鈉及帕米膦酸佐劑效應(yīng)研究.pdf

1、在疫苗的使用中，佐劑具有重要的作用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，佐劑的研發(fā)也得到了極大地促進(jìn)，新型佐劑層出不窮，例如CpG二寡聚核苷酸(CpGoligodeoxynucleotides，CpG ODN)佐劑，免疫刺激復(fù)合物(Immunostimulatingcomplex，ISCOM)佐劑，納米佐劑以及Toll樣受體(Toll-like receptors，TLR)依賴型佐劑相繼出現(xiàn)。盡管佐劑的種類繁多，但目前被批準(zhǔn)用于臨床使用的仍然很少

2、，且認(rèn)證使用的包括鋁佐劑在內(nèi)的佐劑在使用中仍然具有著局限性，例如無法有效的增強(qiáng)細(xì)胞免疫、引起局部刺激癥狀等不良反應(yīng)。因此，開發(fā)安全性高、對體液免疫和細(xì)胞免疫均有較好增強(qiáng)作用的新型疫苗佐劑具有重要的意義。
　　低分子量肝素鈉(Low molecular weight heparin sodium，LMWH-Na)和帕米膦酸（Pamidronic acid，PAD）是臨床上分別作為抗凝血劑和治療骨疾病的兩種藥物，LMWH-Na屬于糖胺

3、聚糖(Glycosaminoglycan，GAG)家族中肝素類物質(zhì)，PAD屬于雙膦酸鹽物質(zhì)。近年來，研究人員發(fā)現(xiàn)肝素類物質(zhì)和雙膦酸鹽具有多種生物功能，例如免疫調(diào)節(jié)作用和抗腫瘤作用，尤其是兩者的免疫調(diào)節(jié)作用受到許多研究人員的青睞，并且在機(jī)制研究上也取得了一定的成果。另外，LMWH-Na和PAD結(jié)構(gòu)成分明確，易于生產(chǎn)、保存和運輸，且作為臨床藥物具有一定的安全性，因此，具有作為佐劑的潛力。
　　基于肝素類藥物以及雙膦酸鹽的免疫調(diào)節(jié)作用，

4、本實驗旨在初步探討LMWH-Na和PAD作為佐劑對甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus，HAV)疫苗誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響。實驗中將甲型肝炎減毒活疫苗HepA-l(18 EU)與5種不同劑量的LMWH-Na以及4種不同劑量的PAD分別混合作為實驗組，并取生理鹽水作為陰性對照組、HepA-1(18 EU)作為陽性對照組、HepA-1混合Al(OH)3(300μg)作為鋁佐劑對照組，于0周經(jīng)背部皮下注射，共免疫一次，并在免疫

5、后第4、8、12、16周進(jìn)行尾靜脈采血，采用ELISA法檢測小鼠血清中抗-HAV抗原特異性IgG抗體水平。在實驗期間，對小鼠的健康狀況進(jìn)行觀察，并于實驗結(jié)束時，取陰性對照組以及LMWH-Na和PAD最大劑量組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟各主要器官制作病理切片進(jìn)行對比觀察。實驗結(jié)果表明，LMWH-Na具有一定的佐劑效應(yīng)，其佐劑效應(yīng)隨著時間的延長而增加，至第8周達(dá)到高峰，LMWH-Na的佐劑效應(yīng)并不是隨著注射劑量的升高而增加，而是在10

6、μL/只時具有最佳效果，但其佐劑效應(yīng)不如鋁佐劑。PAD的佐劑效果不佳，PAD各劑量組實驗小鼠的抗-HAV IgG水平在所測各時間點較陽性對照組沒有大幅度增高，表明實驗組小鼠使用PAD作為免疫佐劑后體液免疫效應(yīng)未有顯著增強(qiáng)。分析認(rèn)為，雖然實驗結(jié)果顯示PAD的佐劑效應(yīng)不佳，但這并不意味著其不具有佐劑效應(yīng)，而可能是由于實驗小鼠的鼠齡較小，體內(nèi)免疫系統(tǒng)的發(fā)育并沒有完全成熟造成的，也可能是由于所選擇的PAD劑量不合適，從而不能完全發(fā)揮增強(qiáng)體液免疫