文蛤活性多肽對肝癌細胞SMMC-7721效應的差異蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、文蛤(學名：Meretrix Meretrix Linnaeus，英又名：Hard clam)不僅肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富，而且具有很高的藥用價值。據(jù)報道文蛤具有抗癌、降血糖、降血脂和抗氧化等活性。許多研究者已對文蛤抗癌活性做了研究，證實文蛤提取物具有較強的抗癌活性。 將文蛤肉勻漿、抽提，并通過G-25凝膠層析柱分離，得到具有抑癌活性的組分，初步判斷為肽類物質(zhì)。該組分在濃度為0.5μg/mL時對肝癌細胞SMMC-7721的抑制率能達到

2、50.6％。通過光學顯微鏡觀察，可以發(fā)現(xiàn)肝癌細胞在文蛤提取物作用后形態(tài)發(fā)生很大變化。 利用蛋白質(zhì)組學手段研究文蛤活性多肽對肝癌細胞的作用有助于更好地研究該物質(zhì)抑制肝癌細胞的機制，為后續(xù)的研究提供理論基礎。 通過雙向電泳技術(shù)的建立以及初步優(yōu)化對一些環(huán)節(jié)如樣品處理的方法、上樣量的選擇、電泳參數(shù)的設置、凝膠濃度和SDS凝膠電泳染色方法等進行了優(yōu)化得到了分辨率較好的肝癌細胞SMMC-7721的蛋白圖譜。進一步通過2D軟件分析圖譜

3、，確定差異點。進行膠內(nèi)酶解并對酶解條件進行了優(yōu)化。利用MALDI-TOF質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析。最后利用質(zhì)譜數(shù)據(jù)在網(wǎng)上進行檢索鑒定差異蛋白質(zhì)。 通過圖譜分析找到136個差異蛋白其中96個蛋白表達下調(diào)，40個蛋白表達上調(diào)。對其中差異較明顯的點進行了鑒定，最終鑒定出10種差異蛋白。其中6個蛋白表達下調(diào)，3個蛋白表達上調(diào)。另有一個蛋白等電點發(fā)生了變化。這些差異蛋白中有分子伴侶蛋白、細胞骨架蛋白、鋅指蛋白、代謝相關(guān)蛋白、調(diào)控蛋白等。可見細胞