Enterococcus faecalis磷酸甘油氧化酶基本性質的研究.pdf

1、核糖體小亞基RNA(16S rRNA)基因為所有的細菌共有，且其與細菌整個基因組的變化相比，具有高度的保守性。因此用16S rDNA保守區(qū)引物進行PCR擴增，可快速檢測細菌。本文用16S rDNA的PCR方法并結合其它形態(tài)學方法，對篩選出的產磷酸甘油氧化酶(GPO，EC 1．1．3．21)細菌進行了鑒定，確定為 Enterococcus faecalis(糞腸球菌)。通過發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)，經離心收集菌體，超聲波破碎，40％～80％硫酸銨沉

2、淀法或雙水相萃取，繼而采用Q-Sepharose FF、 Phenyl-Sepharose CL-4B、Chelating Sepharose FF和Sephacryl S-200HR層析純化，純化的GPO在還原、非還原SDS-PAGE中顯示單一條蛋白著色帶，對應的表觀分子質量為67．6 kDa，用HPLC測得其表觀分子質量為121 kDa，綜合分析推測該酶由2個分子質量相同的亞基以非共價鍵聚合組成。GPO的最適反應溫度為35℃，最適p