大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)大鼠骨骼肌線粒體自噬的機(jī)制及針刺干預(yù)研究.pdf

1、目的：觀察一次大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠骨骼肌線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響，分析線粒體自噬蛋白及相關(guān)蛋白的變化，探討大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)骨骼肌線粒體自噬的分子機(jī)制；觀察針刺對(duì)大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后骨骼肌線粒體的影響，并闡明其作用機(jī)理。
　　方法：將雄性SD大鼠作為研究對(duì)象。研究一和研究二分為對(duì)照組（C）和運(yùn)動(dòng)組（E），E組進(jìn)行一次大負(fù)荷下坡跑；研究三分為安靜對(duì)照組（C）、單純運(yùn)動(dòng)組（E）、單純針刺組（A）和運(yùn)動(dòng)針刺組（EA），E和EA組進(jìn)行下坡跑運(yùn)動(dòng)，A組和EA

2、組施加針刺處理。各組又按時(shí)相點(diǎn)劃分為0h、12h、24h、48h和72h組，分別于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)分離大鼠比目魚肌進(jìn)行檢測(cè)。使用透射電鏡觀察骨骼肌線粒體超微結(jié)構(gòu)變化；采用ELISA方法測(cè)定線粒體定量酶CS的含量以及線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ、Ⅳ的活性變化；應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)骨骼肌COXⅠ、PINK1和線粒體中Parkin、LC3的蛋白表達(dá)；利用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀測(cè)Parkin、Ub、p62、LC3分別與線粒體的共定位及量。

3、　　結(jié)果：（1）一次大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后比目魚肌線粒體出現(xiàn)明顯腫脹、肌膜下積聚等超微結(jié)構(gòu)異常變化，且伴有大量不同成熟階段的自噬體形成，CS的含量減少，呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ、Ⅳ活性以及COXⅠ蛋白表達(dá)出現(xiàn)一過性的下調(diào)。（2）一次大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后線粒體自噬蛋白PINK1、Parkin以及自噬相關(guān)蛋白Ub、p62、LC3均出現(xiàn)一過性的表達(dá)升高，免疫熒光結(jié)果和蛋白表達(dá)結(jié)果一致。（3）運(yùn)動(dòng)后針刺能明顯改善線粒體超微結(jié)構(gòu)的病理學(xué)改變，有自噬溶酶體的出現(xiàn)，抑制CS的含

4、量減少，上調(diào)呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ、Ⅳ活性以及COXⅠ蛋白表達(dá)，下調(diào)PINK1、Parkin、Ub、p62、LC3在線粒體上的表達(dá)，免疫熒光結(jié)果和蛋白表達(dá)結(jié)果一致。
　　結(jié)論：（1）一次大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致骨骼肌線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損，有大量自噬體形成，可能誘導(dǎo)了線粒體自噬的發(fā)生。（2）一次大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)激活PINK1/Parkin通路，進(jìn)而使Ub和p62在線粒體上表達(dá)最終促進(jìn)LC3與線粒體結(jié)合，三者協(xié)同調(diào)控線粒體自噬的發(fā)生。（3）運(yùn)動(dòng)后針刺使線粒