GCM1、Syncytin-1在子癇前期患者外周血及胎盤(pán)組織中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：
　　子癇前期（preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，可致圍產(chǎn)期母兒產(chǎn)生不良妊娠結(jié)局，是孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒病死率升高的主要原因，其基本病理生理變化為全身小血管痙攣。一直以來(lái)，子癇前期的發(fā)病機(jī)制都是產(chǎn)科領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，與胎盤(pán)淺著床、血管重鑄障礙、氧化應(yīng)激、凝血系統(tǒng)失衡、炎癥反應(yīng)及代謝異常等有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)胎盤(pán)淺著床、血管重鑄障礙與胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的發(fā)育和功能異常有關(guān)。胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)揮正常功能需要多種蛋白因子共同作用，如：G

2、CM家族、合胞素、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子、可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子以及HtrA家族等。GCM1即GCMa，它是胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞分化融合過(guò)程中所必需的轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控多種相關(guān)基因的表達(dá)，參與胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖、分化以及融合。而Syncytin-l是由人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄缺陷病毒（HERV）系列中HERV-W編碼而形成的糖包膜蛋白，主要表達(dá)于胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，GCM1作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)Syncytin-1的表達(dá)，二者相互作用共同參與滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、分

3、化、融合以及細(xì)胞凋亡。本研究通過(guò)檢測(cè)GCM1、Syncytin-1在正常妊娠孕婦與子癇前期患者外周血及胎盤(pán)組織中的表達(dá)水平，分析兩組間 GCM1和Syncytin-1的表達(dá)差異以及二者之間的相關(guān)性，以探討其與子癇前期發(fā)病及嚴(yán)重程度的相關(guān)性，為子癇前期的早期診斷及病情評(píng)估提供依據(jù)。
　　方法：
　　1研究對(duì)象：依據(jù)《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選擇2015-06至2016-08河北醫(yī)科大學(xué)第二

4、醫(yī)院收治的重度子癇前期患者130例，同期隨機(jī)選取正常孕婦61例，共納入病例191例，分為三組，早發(fā)組為早發(fā)型子癇前期（early onset severe preeclampsia）患者63例，晚發(fā)組為晚發(fā)型子癇前期（late onset preeclampsia）患者67例，正常對(duì)照組61例；早發(fā)組按孕周進(jìn)一步分層為30-31+6周共31例，32-34周共32例，晚發(fā)組按孕周進(jìn)一步分層為34+1-36+6周共32例，≥37周共35例。

5、
　　2標(biāo)本采集：在我院門(mén)診正規(guī)產(chǎn)檢并在我院剖宮產(chǎn)終止妊娠的初產(chǎn)婦在治療前取空腹靜脈血3ml，在室溫下2000rpm離心10分鐘，將分離出的血清置于EP管中，保存于-80℃冰箱，待測(cè)。胎盤(pán)娩出后30min內(nèi)收取胎盤(pán)母體面的中心部位，避開(kāi)鈣化灶，約1cm3大小組織，生理鹽水沖洗后用濾紙吸干水分，在10％福爾馬林溶液中室溫固定48h，并進(jìn)行常規(guī)的脫水、石蠟包埋等。
　　3檢驗(yàn)指標(biāo)：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定研究對(duì)象血清

6、中GCM1、Syncytin-1的濃度，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry， IHC）測(cè)定胎盤(pán)中GCM1、Syncytin-1的表達(dá)水平，并記錄年齡、分娩孕周、孕次、身高、體重及血壓等指標(biāo)。采用HE染色后觀察胎盤(pán)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞及絨毛間質(zhì)纖維化和絨毛血管病變情況；顯微鏡下觀察胎盤(pán)中GCM1、Syncytin-1表達(dá)并人工計(jì)數(shù)進(jìn)行圖像分析。
　　4數(shù)據(jù)分析：采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分

7、析。
　　結(jié)果：
　　1 GCM1在對(duì)照組、早發(fā)組、晚發(fā)組血清中的表達(dá)水平分別平均為（11.61±2.27）ng/ml，（4.44±0.70）ng/ml、（7.27±0.97）ng/ml，子癇前期患者與正常孕婦相比，GCM1的表達(dá)水平明顯降低，且早發(fā)組降低更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。GCM1在30-31+6周組、32-34周組、34+1-36+6周組、≥37周組患者血清中的表達(dá)水平分別平均為（3.99±0.4

8、7） ng/ml，（4.87±0.50）ng/ml，（6.76±0.86）ng/ml，（7.99±0.71）ng/ml。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出，30-31+6周組與32-34周組相比，GCM1表達(dá)水平降低，32-34周組與34+1-36+6組相比，GCM1表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)，34+1-36+6周組與≥37周組相比，表達(dá)水平也呈下降趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Syncytin-1在對(duì)照組、早發(fā)組、晚發(fā)組血清中的表達(dá)水平分別平均為（

9、10.47±0.62）ng/ml、（3.98±0.81）ng/ml、（7.73±1.14）ng/ml，子癇前期患者與正常孕婦相比，Syncytin-1表達(dá)水平明顯降低，且早發(fā)組降低更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Syncytin-1在30-31+6周組、32-34周組、34+1-36+6周組、≥37周組患者血清中的表達(dá)水平分別平均為（3.65±0.40）ng/ml，（4.43±0.82）ng/ml，（6.81±0.87）ng

10、/ml，（8.15±1.36） ng/ml。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出，30-31+6周組與32-34周組相比，Syncytin-1表達(dá)水平降低，32-34周組與34+1-36+6組相比，Syncytin-1表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)，34+1-36+6周組與≥37周組相比，表達(dá)水平也呈下降趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2免疫組織化學(xué)顯示GCM1、Syncytin-1在重度子癇前期患者和正常孕婦胎盤(pán)組織中均有表達(dá)。GCM1主要表達(dá)

11、于胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞漿，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核也有少量表達(dá)；Syncytin-1主要表達(dá)于胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。GCM1在對(duì)照組、早發(fā)組、晚發(fā)組的表達(dá)強(qiáng)度分別平均為（0.34±0.06）、（0.16±0.02）、（0.23±0.03）；Syncytin-1在對(duì)照組、早發(fā)組、晚發(fā)組的表達(dá)強(qiáng)度分別平均為（0.31±0.02）、（0.15±0.02）、（0.25±0.03），子癇前期患者與正常孕婦相比，GCM1、Syncytin

12、-1的表達(dá)強(qiáng)度均明顯降低，且早發(fā)組降低的更為明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。GCM1在30-31+6周組、32-34周組、34+1-36+6周組、≥37周組的表達(dá)強(qiáng)度分別平均為（0.14±0.01）、（0.17±0.01）、（0.22±0.02）、（0.24±0.03），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出，30-31+6周組與32-34周組相比，GCM1表達(dá)強(qiáng)度明顯降低，32-34周組與34+1-36+6組相比，GCM1表達(dá)強(qiáng)度呈下降趨勢(shì)，3

13、4+1-36+6周組與≥37周組相比，表達(dá)強(qiáng)度也呈降低趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Syncytin-1在30-31+6周組、32-34周組、34+1-36+6周組、≥37周組的表達(dá)強(qiáng)度分別為（0.14±0.02）、（0.16±0.02）、（0.22±0.03）、（0.24±0.02），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出，30-31+6周組與32-34周組相比，Syncytin-1表達(dá)強(qiáng)度明顯降低，32-34周組與34+1-36+6組相比，

14、Syncytin-1表達(dá)強(qiáng)度呈下降趨勢(shì)，34+1-36+6周組與≥37周組相比，表達(dá)強(qiáng)度也呈下降趨勢(shì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3 HE染色結(jié)果：對(duì)照組為正常妊娠孕婦的胎盤(pán)組織，可見(jiàn)絨毛成熟良好，絨毛及間質(zhì)血管豐富，形態(tài)正常，間質(zhì)少，絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞核排列較整齊；晚發(fā)型重度子癇前期組胎盤(pán)絨毛成熟不良，絨毛表層為細(xì)胞核排列紊亂的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞，小動(dòng)脈平滑肌數(shù)量減少，可見(jiàn)玻璃樣變；早發(fā)型子癇前期組絨毛數(shù)量更

15、少，絨毛明顯退變壞死，絨毛表面合體滋養(yǎng)層細(xì)胞大片融合。
　　4外周血及胎盤(pán)組織中GCM1、Syncytin-1的相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)（r=0.84，P<0.001；r=0.84，P<0.01）。
　　結(jié)論:
　　1重度子癇前期患者外周血中GCM1和 Syncytin-1表達(dá)水平降低，二者呈相關(guān)性，且早發(fā)組低于晚發(fā)組，發(fā)病孕周越小，表達(dá)水平越低。
　　2重度子癇前期患者胎盤(pán)組織中GCM1和 Syncytin-