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1、為了獲得有活性的hsTRAIL蛋白,本實(shí)驗(yàn)對(duì)hsTRAIL包含體進(jìn)行了復(fù)性的研究。通過對(duì)hsTRAIL包涵體洗滌條件的研究,使蛋白純度提高到90%以上,并確定了其簡(jiǎn)單適宜的復(fù)性方法,純度達(dá)98%。采用稀釋法可使得近65%的蛋白恢復(fù)可溶性,而透析法也能獲得33%的可溶性蛋白。本實(shí)驗(yàn)中,我們對(duì)稀釋復(fù)性的 hsTRAIL蛋白進(jìn)行了生物學(xué)活性的測(cè)定。結(jié)果顯示:復(fù)性后的hsTRAIL蛋白能誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡,而對(duì)正常的人胚腎細(xì)胞293細(xì)胞無影響
2、,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相一致,表明復(fù)性后的hsTRAIL蛋白具有良好的生物學(xué)活性。 以重組枯草芽孢桿菌谷氨酰胺合成酶.(L-谷氨酸:氨連接酶,Glutamine Synthetase,GS EC 6.3.1.2)蛋白表達(dá)宿主菌株BL21(DE3)(pET3C/谷氨酰胺合成酶)作為研究對(duì)象,借助SDS PAGE分析方法,對(duì)于用乳糖誘導(dǎo)由T71ac啟動(dòng)子控制的重組目的產(chǎn)物蛋白的各種基本參數(shù)進(jìn)行了初步的研究。研究了最佳誘導(dǎo)起始生
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