西北地區(qū)野豌豆根瘤菌多樣性與系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、本論文采用多相分類技術(shù)包括表型分析(105項生理生化測定，數(shù)值分類)和遺傳型分析(16S rDNA，IGS，nodA和，nifH4個基因片段的指紋圖譜分析)，對分離自新疆，甘肅，陜西和寧夏四個地區(qū)的49株野豌豆根瘤菌進行了多樣性分析和系統(tǒng)發(fā)育研究。 16S rDNA的PCR—RFLP的分析結(jié)果表明，3種內(nèi)切酶酶切圖譜類型組合共有12種。IGS PCR-RFLP分析得到的酶切圖譜類型組合總共有21種，反映了西北地區(qū)野豌豆根瘤菌的豐

2、富的多樣性。16S rDNA全序列系統(tǒng)發(fā)育樹中6個代表菌株分布于3個系統(tǒng)發(fā)育分支上，其中代表菌株CCNWSX0050，CCNWGS0055和CCNWGS0059位于根瘤菌屬(Rhizobium)的分支，它們與參比菌株R．leguminosarum(USDA2370)的序列同源性分別為99.6％，99.5％和99.4％；CCNWGS0061和CCNWGS0062位于Sinorhizobium分支上，其中CCNWGS0061與參比菌株S.f

3、redii和S.xingiangense位于一個小分支，它們間的序列同源性分別為95.9％和99.7％；CCNWGS0062與參比菌株S.meliloti，S.medicae和S.arboris位于另一小分支，它們間的序列同源性分別為為100％，99.7％和98.1％。 nodA基因片段的RFLP分析共得到5種基因型，nifH基因片段的RFLP分析共得到16種基因型。供試菌株的以結(jié)瘤基因nodA序列為基礎(chǔ)的系統(tǒng)發(fā)育樹和以固氮基因

4、nifH序列為基礎(chǔ)的系統(tǒng)發(fā)育樹與16SrDNA序列的系統(tǒng)發(fā)育樹基本一致，供試菌株主要分布在根瘤菌屬和中華根瘤菌屬兩個分支中，但也有些差異。 生理生化試驗結(jié)果表明，在80％的相似水平上供試菌株主要分為四個表觀群：群Ⅰ、群Ⅱ、群Ⅲ和群Ⅳ。群Ⅰ包括23株菌，在89％的水平上又可分為兩個亞群；群Ⅱ包括5株菌，與參比菌株M.septentrionale在89％的水平上聚到一起；群Ⅲ包括10株菌，在87％的水平上與S.fredii聚到一起；