乳腺癌免疫微環(huán)境研究及預(yù)后相關(guān)性分析.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分進(jìn)行論述：
　　第一部分
　　目的：
　　腫瘤免疫微環(huán)境在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。本研究希望通過(guò)分析免疫微環(huán)境中的一些免疫學(xué)指標(biāo)在不同類(lèi)型乳腺癌中的表達(dá)差異，來(lái)探討免疫微環(huán)境與乳腺癌的關(guān)系，為進(jìn)一步的預(yù)后分析和免疫治療提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　方法：
　　根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)收集2008年01月至2012年12月首次于長(zhǎng)征院普外科行乳腺癌手術(shù)治療的256例乳腺癌患者的臨床病理、隨訪資料

2、及石蠟組織標(biāo)本。應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組化的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)6種免疫學(xué)標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，分別記錄腫瘤細(xì)胞及腫瘤間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的程序死亡性配體-1(programmed death ligand-1，PD-L1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor，TGF-1）的陽(yáng)性細(xì)胞百分率、程序性死亡受體-1(programmed death-1，PD-1)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞抗原-4（Cytotoxic T cell ant

3、igen-4，CTLA-4）、伽馬干擾素（interferon-Y，IFN-γ的陽(yáng)性細(xì)胞百分率以及腫瘤上皮內(nèi)、瘤內(nèi)間質(zhì)FOXP3+淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)密度。以5％為cut-off值將PD-L1、PD-1分成陽(yáng)性表達(dá)、陰性表達(dá)兩組，以最小p值法計(jì)算其他指標(biāo)的cut-off值并分別將其分為高表達(dá)（或高密度浸潤(rùn)）、低表達(dá)（或低密度浸潤(rùn)）兩組;進(jìn)而分析不同年齡、腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)、Ki-67表達(dá)、ER、PR、HER-2、分子分型、病理分期的乳腺

4、癌之間各指標(biāo)的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　1、共可獲得205例PD-L1，200例PD-1、IFN-γ及TGF-β1，199例CTLA-4，194例FOXP3+淋巴細(xì)胞。
　　2、PD-1、腫瘤細(xì)胞及瘤內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的PD-L1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為52％、81.46％、49.76％; CTLA-4、IFN-γ、腫瘤細(xì)胞及瘤內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的TGF-β1的高表達(dá)率分別為56.06％、63.5％、88％、10.5％。在乳腺癌上

5、皮內(nèi)浸潤(rùn)的FOXP3+淋巴細(xì)胞密度的均值為(2.73±3.77)個(gè)/0.0625mm2，中位數(shù)為1.5個(gè)，范圍是(0～20.50)個(gè);在乳腺癌瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤(rùn)的FOXP3+淋巴細(xì)胞密度的均值為(15.14±15.08)個(gè)/0.0625mm2。
　　3、腫瘤細(xì)胞表達(dá)的PD-L1在ER陰性乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率為27.14％，顯著高于ER陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0261); HER-2陽(yáng)性乳腺癌中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率為26.39％，顯著高于HER

6、-2陰性乳腺癌(P=0.0483)。瘤內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的PD-L1在ER陰性乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為68.57％，顯著高于ER陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0002);在PR陰性乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為62.20％，顯著高于PR陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0065);在HER-2陽(yáng)性乳腺癌中瘤內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率為63.89％，顯著高于HER-2陰性乳腺癌(P=0.0067)。
　　4、腫瘤細(xì)胞表達(dá)的TGF-β1，在ER陰性乳腺癌中高表達(dá)

7、率為97.10％，顯著高于ER陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0109);相比于PR陽(yáng)性乳腺癌，PR陰性乳腺癌的TGF-β1高表達(dá)率(96.34％)更高(P=0.0059)。浸潤(rùn)在腫瘤間質(zhì)的淋巴細(xì)胞上的TGF-β1在不同類(lèi)型乳腺癌間的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5、浸潤(rùn)在乳腺癌腫瘤間質(zhì)中淋巴細(xì)胞上的PD-1在不同類(lèi)型乳腺癌間的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　6、在患者年齡＜50歲的乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)高密度浸潤(rùn)F

8、OXP3+淋巴細(xì)胞的比例為23.75％，顯著高于患者年齡≥50歲的乳腺癌(P=0.0392);在Ki-67≥14％的乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)高密度浸潤(rùn)FOXP3+淋巴細(xì)胞的乳腺癌所占比例為20％，高于Ki-67＜14％的乳腺癌(P=0.0460);在ER陰性乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)FOXP3+淋巴細(xì)胞高密度浸潤(rùn)比例為25.76％，顯著高于ER陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0237);在ⅢB～ⅢC的乳腺癌中，腫瘤上皮內(nèi)高密度浸潤(rùn)FOXP3+淋巴細(xì)胞的比例(

9、32.00％)亦顯著高于Ⅰ～ⅢA的乳腺癌(P=0.0379)。
　　7、在ER陰性乳腺癌中，瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞表達(dá)的CTLA-4，其高表達(dá)百分比為66.67％，顯著高于ER陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0256);在PR陰性乳腺癌中，則其高表達(dá)百分比為64.20％，高于PR陽(yáng)性乳腺癌(P=0.0256)。
　　8、在IDC的組織學(xué)類(lèi)型中，瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞表達(dá)的IFN-γ，其高表達(dá)率為65.59％，而在其他組織學(xué)類(lèi)型中為35.

10、71％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0332);在ER陰性的乳腺癌中，IFN-γ的高表達(dá)率為73.53％，而在ER陽(yáng)性的乳腺癌中為58.78％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=58.78)。
　　結(jié)論：
　　1、PD-L1在乳腺癌腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)，與ER陰性、HER-2陽(yáng)性相關(guān);而PD-L1在乳腺癌瘤內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)，與ER陰性、PR陰性、HER-2陽(yáng)性相關(guān);
　　2、TGF-β1在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)，與ER陰性、PR陰性相關(guān);<

11、br>　　3、乳腺癌中PD-1的表達(dá)與各臨床病理因素均無(wú)相關(guān)性;
　　4、乳腺癌腫瘤上皮內(nèi)FOXP3+淋巴細(xì)胞高密度浸潤(rùn)，與年齡＞50歲、Ki-67≥14％、ER陰性、病理分期ⅢB～ⅢC期相關(guān)。而乳腺癌瘤內(nèi)間質(zhì)中高密度浸潤(rùn)FOXP3+淋巴細(xì)胞與IDC、ER陰性、PR陰性、HER-2陽(yáng)性相關(guān);
　　5、乳腺癌微環(huán)境中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞上CTLA-4的高表達(dá)與ER陰性、PR陰性相關(guān);
　　6、乳腺癌微環(huán)境中淋巴細(xì)胞IFN-γ的

12、高表達(dá)與ER陰性、IDC相關(guān)。
　　第二部分
　　目的：
　　乳腺癌的預(yù)后與腫瘤免疫微環(huán)境密切相關(guān)。本部分研究旨在篩選出乳腺癌免疫微環(huán)境中與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的免疫標(biāo)記物，并進(jìn)一步分析主要在哪些類(lèi)型的乳腺癌中具有預(yù)后作用。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)方法同第一部分，采用COX單因素分析各個(gè)免疫學(xué)指標(biāo)與DFS的關(guān)系;采用COX多因素分析篩選出DFS的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo);按臨床病理因素分層，采用log-rank檢驗(yàn)在每一層中分

13、析篩選出來(lái)的指標(biāo)與DFS的關(guān)系。本部分還分析了PD-1表達(dá)與IFN-γ表達(dá)之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1、COX單因素分析中，乳腺癌淋巴細(xì)胞表面PD-1陽(yáng)性表達(dá)較陰性表達(dá)的DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)（RR=0.53，95％CI0.29～0.99，P=0.0453）;相比于FOXP3+淋巴細(xì)胞在乳腺癌腫瘤間質(zhì)內(nèi)的低密度浸潤(rùn)，高密度浸潤(rùn)者的DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(RR=2.35,95％CI:1.00～5.53, P=0.0500

14、)。
　　2、COX多因素分析中，淋巴細(xì)胞中的PD-1陽(yáng)性表達(dá)與DFS呈顯著正相關(guān)(OR=0.47，95％CI:0.25～0.89);瘤內(nèi)間質(zhì)FOXP3+淋巴細(xì)胞高密度浸潤(rùn)是DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=2.76，95％CI:1.07，7.09)。
　　3、分層分析中，在年齡≥50歲的患者中，淋巴細(xì)胞PD-1陽(yáng)性表達(dá)者較陰性表達(dá)者，其DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.014)，在IDC的患者中，淋巴細(xì)胞PD-1陽(yáng)性表達(dá)者較陰性表

15、達(dá)者，其DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.045);在PR陽(yáng)性的患者中，淋巴細(xì)胞PD-1陽(yáng)性表達(dá)者較陰性表達(dá)者，其DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.009);在HER-2陽(yáng)性的患者中，淋巴細(xì)胞PD-1陽(yáng)性表達(dá)者較陰性表達(dá)者，其DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.0224);在非三陰型乳腺癌的患者中，淋巴細(xì)胞PD-1陽(yáng)性表達(dá)者較陰性表達(dá)者，其DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(0.0327);在Ⅰ～ⅢA期乳腺癌的患者中，淋巴細(xì)胞PD-1陽(yáng)性表達(dá)者較陰性表達(dá)者

16、，其DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.0238)。在年齡＜50歲的患者中，F(xiàn)OXP3+淋巴細(xì)胞在乳腺癌間質(zhì)中高密度浸潤(rùn)較低密度浸潤(rùn)患者的DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.009);在HER-2陰性的患者中，表達(dá)FOXP3+的淋巴細(xì)胞在乳腺癌間質(zhì)中高密度浸潤(rùn)較低密度浸潤(rùn)的DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.009);在非三陰型乳腺癌患者中，F(xiàn)OXP3+淋巴細(xì)胞在乳腺癌間質(zhì)中高密度浸潤(rùn)相對(duì)低密度浸潤(rùn)的DFS生存時(shí)間相對(duì)更長(zhǎng)(P=0.0412)。

17、r>　　4、進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)IFN-γ高表達(dá)與PD-1陽(yáng)性率呈正向相關(guān)(OR=2.67，95％CI:1.45～4.92) P=0.0017)。
　　結(jié)論：
　　1、乳腺癌中PD-1的表達(dá)是DFS的獨(dú)立預(yù)后因素，兩者存在正向相關(guān)關(guān)系;
　　2、瘤內(nèi)間質(zhì)浸潤(rùn)的FOXP3+淋巴細(xì)胞是DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;
　　3、在年齡≥50歲、在IDC、PR陽(yáng)性、HER-2陽(yáng)性、非三陰型、Ⅰ～ⅢA期的乳腺癌患者中，PD-1陽(yáng)性表達(dá)與D