間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性研究及肌腱損傷和肌肉損傷動(dòng)物模型的構(gòu)建.pdf

1、肌腱損傷和肌肉損傷是體育運(yùn)動(dòng)中常見的運(yùn)動(dòng)性疾病，影響運(yùn)動(dòng)員機(jī)能水平和運(yùn)動(dòng)能力的發(fā)揮，成為臨床醫(yī)學(xué)和運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)的主要研究問(wèn)題。干細(xì)胞在個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育和病理組織再生修復(fù)中具有重要作用。干細(xì)胞發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的研究為肌腱和肌肉生理、病理機(jī)制的研究提供了基礎(chǔ)，同時(shí)為干細(xì)胞促進(jìn)損傷的修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究主要建立了肌腱干細(xì)胞和肌肉衛(wèi)星細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系，研究其生物學(xué)特性，建立肌腱損傷和肌肉損傷小鼠動(dòng)物模型，研究干細(xì)胞在運(yùn)動(dòng)性損傷修復(fù)中的作用，得

2、到以下結(jié)果：
　　1.采用 I型膠原酶消化分離胎牛和仔豬跟腱來(lái)源肌腱干細(xì)胞，分離后的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下分別傳代至43代和11代；分別通過(guò)RT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè)法對(duì)兩個(gè)物種來(lái)源的肌腱干細(xì)胞進(jìn)行特異性標(biāo)記物鑒定；免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，細(xì)胞對(duì) CollagenⅠ、CollagenⅢ、CD105、CD44、Tenascin-C,Tnmd、nucleostemin等均表達(dá)陽(yáng)性；RT-PCR結(jié)果顯示，不同傳代次數(shù)的細(xì)胞均表達(dá) C

3、ollagenⅠ和 CollagenⅢ，不表達(dá) CollagenⅡ，表明所分離的細(xì)胞為肌腱干細(xì)胞；對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性鑒定；在體外通過(guò)不同誘導(dǎo)液，將肌腱干細(xì)胞分別誘導(dǎo)成成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)到軟骨細(xì)胞特異性基因均陽(yáng)性表達(dá)；
　　2.采用I型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化法消化仔豬脛骨前肌肌肉組織，分離的細(xì)胞接種后通過(guò)差速培養(yǎng)法純化并培養(yǎng)至12代，通過(guò) RT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè)鑒定細(xì)胞均表達(dá)Myod，Moy

4、genin，Pax7，c-Met，PCNA和 Nanog，對(duì)分離純化后的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性和多分化潛能研究。
　　3.采用心臟毒素（CTX）構(gòu)建小鼠肌肉損傷模型，石蠟病理切片顯示肌肉正常組織被破壞，血清學(xué)檢測(cè)肌肉中肌酸激酶（CK）含量明顯超出正常范圍，對(duì)肌肉衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞示蹤劑（CM-Dil）標(biāo)記后移植到損傷部位，組織學(xué)和血清學(xué)結(jié)果顯示肌肉損傷有所恢復(fù)；通過(guò)I型膠原酶誘導(dǎo)的小鼠肌腱損傷制備小鼠肌腱損傷模型，石蠟切片顯示肌腱膠原排

5、列紊亂，肌腱基質(zhì)嚴(yán)重破壞，對(duì)肌腱干細(xì)胞用 C M-Dil標(biāo)記，將標(biāo)記后的細(xì)胞注射到小鼠肌腱損傷位點(diǎn)，觀察組織學(xué)和血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果顯示細(xì)胞移植治療組損傷肌腱有良好修復(fù)；
　　綜上所述，本文介紹了肌腱損傷、肌肉損傷和干細(xì)胞研究進(jìn)展，在體外成功分離、培養(yǎng)了胎牛、仔豬跟腱來(lái)源TDSCs和仔豬肌肉衛(wèi)星細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性和多分化潛能進(jìn)行了研究；通過(guò)干細(xì)胞體外移植治療，損傷的小鼠肌腱和肌肉組織得到恢復(fù),初步為以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的細(xì)胞療法治療