三種方法應(yīng)用于人卵巢組織玻璃化冷凍的效果分析.pdf

1、目的：
　　卵巢組織冷凍作為女性生育力保存的一種方法，具有廣闊的應(yīng)用及發(fā)展前景。目前卵巢組織冷凍仍是一項試驗性技術(shù)，標(biāo)準(zhǔn)化的冷凍方案尚未確定。本研究初步比較三種不同的冷凍方法對人卵巢皮質(zhì)組織玻璃化冷凍效果的影響，旨在探討人卵巢皮質(zhì)組織玻璃化冷凍的可行方案。
　　材料與方法：
　　收集2014.3～2014.9因卵巢良性囊腫于天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院實施手術(shù)的40例患者的卵巢皮質(zhì)塊作為實驗材料。術(shù)中切除的卵巢組織放入裝有磷酸

2、鹽緩沖液的離心管中，置于冰上半小時內(nèi)送至實驗室。將卵巢皮質(zhì)切割成大小為5×1×1mm3的組織塊，每位患者的卵巢組織塊隨機平均分為四組：一組作為新鮮對照組，剩余三組作為實驗組行玻璃化冷凍。本實驗中聯(lián)合使用低濃度的乙二醇和二甲基亞砜作為玻璃化冷凍保護劑，實驗組分別行微滴法玻璃化冷凍、凍存管法玻璃化冷凍、尼龍篩網(wǎng)法玻璃化冷凍，放入液氮保存一周后解凍復(fù)蘇。觀察并計數(shù)新鮮組和實驗組卵巢組織內(nèi)各級卵泡數(shù)、計算始基卵泡的正常形態(tài)率，通過TUNEL法檢

3、測卵巢組織細(xì)胞凋亡情況，通過免疫組織化學(xué)法檢測細(xì)胞增殖情況，比較并分析四組數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1.卵巢組織形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果：微滴法組、尼龍篩網(wǎng)法組與新鮮組相比，總卵泡數(shù)及始基卵泡所占比例無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），凍存管法組的總卵泡數(shù)及始基卵泡所占比例明顯少于新鮮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。新鮮組始基卵泡正常形態(tài)率明顯高于三個實驗組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.956， P=0.008；x2=27.038，P=

4、0.000；x2=10.963，P=0.001），微滴法組、尼龍篩網(wǎng)法組始基卵泡正常形態(tài)率高于凍存管法組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=8.444， P=0.004；x2=5.309，P=0.021），微滴法組與尼龍篩網(wǎng)法組始基卵泡正常形態(tài)率之間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=0.507，P=0.476）。光鏡下觀察可見實驗組部分卵巢組織出現(xiàn)間質(zhì)水腫、間質(zhì)細(xì)胞連接疏松、顆粒細(xì)胞層與卵泡膜之間空隙增大。
　　2.TUNEL檢測結(jié)果：四組卵巢

5、組織中各級卵泡中卵母細(xì)胞及顆粒細(xì)胞中均未見凋亡細(xì)胞，而卵巢間質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)可見凋亡細(xì)胞。
　　3.免疫組化Ki67表達(dá)結(jié)果：微滴法組、尼龍篩網(wǎng)法組Ki67陽性細(xì)胞數(shù)目與新鮮組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），凍存管法組Ki67陽性細(xì)胞數(shù)目明顯低于新鮮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05），微滴法組和尼龍篩網(wǎng)法組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.本課題為天津市衛(wèi)生局資助項目，首次全面系統(tǒng)地采用不同冷凍試劑

6、配伍不同冷凍載體對人卵巢組織玻璃化冷凍的效果進(jìn)行觀察評價。本部分實驗內(nèi)容固定冷凍試劑不變，分析并討論三種冷凍載體應(yīng)用于人卵巢組織玻璃化冷凍的效果。
　　2.從卵巢組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞增殖三個方面判斷：微滴法及尼龍篩網(wǎng)法的玻璃化冷凍效果優(yōu)于凍存管法。
　　3.新型冷凍載體尼龍篩網(wǎng)為人卵巢組織玻璃化冷凍提供了新的選擇。
　　4.本實驗結(jié)果表明卵巢組織玻璃化冷凍是保存女性生育力的可行方法。本實驗為臨床正式應(yīng)用卵巢組織冷