羽藻和緣管滸苔提取物對酪氨酸酶活性抑制作用的研究.pdf

1、酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一種廣泛分布于微生物、動植物以及人體當(dāng)中的與黑色素形成相關(guān)的酶。酪氨酸酶在生物體中具有單酚酶活性和二酚酶活性,單酚酶活性能將單酚加氧形成二酚,多酚酶活性能將二酚等多元酚氧化形成醌,這些醌類物質(zhì)多聚化,再與細胞內(nèi)蛋白相互作用最后形成黑色素。酪氨酸酶對于生物體黑色素的形成以及外來物入侵時獲得性免疫反應(yīng)的產(chǎn)生有至關(guān)重要的作用。從天然海藻中篩選具有高效抑制活性的酪氨酸酶抑制劑可以應(yīng)用于色素型皮膚病的治療,研

2、發(fā)美白化妝品、生物農(nóng)藥和食品添加劑等。
　　 本實驗對11種海洋藻類進行了酪氨酸酶抑制活性的篩選,研究了羽藻和緣管滸苔提取物對酪氨酸酶的抑制作用。通過正交試驗確定了這兩種海藻提取物的最佳提取條件,采用有機溶劑萃取分離出兩種海藻提取物的不同組分,通過動力學(xué)學(xué)方法分析對酪氨酸酶的抑制作用類型和機理,相關(guān)研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.對11種海洋藻類進行了酪氨酸酶抑制活性的篩選。篩選體系總體積為5mL,底物多巴含量為1.0m

3、mol／L,磷酸緩沖液pH值為6.8,酪氨酸酶液的終濃度為1.28ug／mL,抑制物終濃度為4mg／mL,反應(yīng)溫度為37℃,測試反應(yīng)時間為1min。結(jié)果表明,在4mg／mL的提取物濃度條件下,紅藻門的叉枝藻、真江籬、蜈蚣藻、珊瑚藻、鴨毛藻和扇形擬伊藻對酪氨酸酶有不同程度的抑制作用,抑制活性均高于20％。其中叉枝藻和真江籬對酪氨酸酶的抑制率達40％以上,綠藻門的羽藻、孔石莼、緣管滸苔對酪氨酸酶表現(xiàn)出不同程度的抑制作用,其中羽藻的抑制率最高

4、,達78％,其次是緣管滸苔40.24％,紅藻門的細枝軟骨藻和褐藻門的角叉菜對酪氨酸酶則表現(xiàn)為反向激活作用,激活率分別為18.18％和20.45％。
　　 2.采用恒溫水浴浸提法對羽藻和緣管滸苔的化學(xué)成分進行了提取,浸提溶劑為乙醇溶液、浸提料液比為1:12,浸提溫度為40℃。首先通過單因素實驗確定單個浸提條件的最佳值,然后利用正交實驗確定出最佳的浸提條件組合。羽藻的最佳浸提條件組合為:60℃恒溫水浴、60％的乙醇濃度、5h的浸提時

5、間和1:14的料液比；緣管滸苔的最佳浸提條件組合為:60℃恒溫水浴、60％的乙醇濃度、5h的浸提時間和1:10的料液比。
　　 3.將兩種海藻的乙醇浸提物經(jīng)有機溶劑萃取依次得到乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性組分,分別測定三種組分的抑制活性、抑制類型和多酚含量。結(jié)果表明:羽藻石油醚組分對酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為2.1mg／mL,屬于非競爭性可逆抑制,抑制常數(shù)為KI=0.33；羽藻乙酸乙酯組分對酪氨酸酶的半抑制濃度IC5

6、0為,0.27mg／mL,屬于非競爭性可逆抑制,抑制常數(shù)為KI=0.13；羽藻水溶性組分對酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為1.0mg／mL,屬于競爭性可逆抑制,抑制常數(shù)為:KI=0.91。緣管滸苔石油醚萃取物對酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為0.29mg／mL,屬于競爭性可逆抑制,抑制常數(shù)為:KI=0.28；緣管滸苔乙酸乙酯組分對酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為0.19mg／mL,屬于非競爭性可逆抑制,抑制常數(shù)為KI=0.08；緣管滸苔水溶性