葛根素對糖尿病大鼠血清及視網(wǎng)膜中AGE-修飾蛋白影響的研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過分析葛根素對糖尿病大鼠血清及視網(wǎng)膜組織中AGE-修飾蛋白表達(dá)水平的影響，為臨床上糖尿病視網(wǎng)膜病變的診斷和治療探索新的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：
　　1.SPF級成年雄性SD大鼠150只，隨機(jī)分為正常對照組1月、3月組（N1，N3）、DM1月、3月組（D1，D3）、葛根素干預(yù)1月、3月組（P1，P3），每組25只。
　　2.通過2％鏈脲佐菌素（STZ）予以大鼠腹腔注射，建立DM大鼠模型，55

2、mg/kg。對照組給予同等劑量的檸檬酸緩沖液腹腔注射。注射后3天后，及1周后大鼠尾靜脈分別取血，測定其空腹血糖，若兩次均≥16.7mmol/L則視為DM造模成功。葛根素干預(yù)組大鼠予以葛根素(80mg/kg/d)灌胃。
　　3.造模成功后，于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（灌胃開始1月、3月后）用10%水合氯醛麻醉大鼠，從心臟取血獲得標(biāo)本，低溫下迅速分離視網(wǎng)膜組織，部分樣品固定后在光鏡及電鏡下進(jìn)行觀察，其余標(biāo)本-80℃低溫保存。
　　4.分離各組

3、大鼠血清，自備視網(wǎng)膜勻漿，ELISA法分析各組大鼠視網(wǎng)膜及血清中AGE-修飾蛋白的總濃度。
　　5.1-DE/Western分離各組大鼠視網(wǎng)膜及血清中AGE-修飾蛋白。Image Lab軟件分析分組大鼠血清及視網(wǎng)膜中AGE-修飾蛋白表達(dá)水平，ANOVA比較各組大鼠視網(wǎng)膜及血清中AGE-修飾蛋白表達(dá)水平的差異，P＜0.05視為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1.糖尿病組大鼠(D1，D3)、葛根素干預(yù)組大鼠(P1，P3)體

4、重均顯著低于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,D1組與D3組、P1組與P3組，及糖尿病組與葛根素干預(yù)組之間大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.糖尿病組大鼠(D1，D3)、葛根素干預(yù)組大鼠(P1，P3)血糖均高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,相同時(shí)間點(diǎn)時(shí)，糖尿病組血糖升高較葛根素干預(yù)組血糖更高（D1vs P1:27.90±1.79vs25.39±2.45；D3vs P3：30.33±1.69vs25.54±

5、2.00，P＜0.05）。D3組大鼠血糖水平顯著高于其余各組（P＜0.05）， P1與P3組間血糖水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.視網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)改變：正常組大鼠（N1、N3）與D1組、P1組間無明顯差異。D3組病變最為嚴(yán)重，視網(wǎng)膜各層細(xì)胞數(shù)量減少、排列紊亂，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重；毛細(xì)血管出現(xiàn)嚴(yán)重的擴(kuò)張充血現(xiàn)象。P3組病變較D3組有所減輕。
　　4.ELISA定量大鼠血清及視網(wǎng)膜中AGE-修飾蛋白濃度。糖尿病組大鼠(D1

6、，D3)、葛根素干預(yù)組大鼠(P1，P3)血清中AGE-修飾蛋白濃度均顯著高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。D3組大鼠血清中AGE-修飾蛋白濃度顯著高于D1組大鼠（P＜0.05）。D1組與P1組大鼠視網(wǎng)膜中AGE-修飾蛋白濃度無統(tǒng)計(jì)性差異（P＞0.05），D3組大鼠視網(wǎng)膜組織中AGE-修飾蛋白濃度顯著高于P3組大鼠（P＜0.05）。
　　5.1-DE/Western共分離出5種差異性表達(dá)的血清AGE-修飾蛋白。糖尿

7、病組大鼠(D1、D3)、葛根素干預(yù)組大鼠(P1、P3)上述5種血清AGE-修飾蛋白表達(dá)量均顯著高于正常對照組大鼠（N1、N3），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。其中2種AGE-修飾蛋白D1組的表達(dá)量顯著高于P1組（P＜0.05），3種AGE-修飾蛋白D3組的表達(dá)量均顯著高于P3組（P＜0.05）。
　　6.1-DE/Western在視網(wǎng)膜組織中共分離出4種差異性表達(dá)的AGE-修飾蛋白，其中3種AGE-修飾蛋白在糖尿病組大鼠(

8、D1，D3)、葛根素干預(yù)組大鼠(P1，P3)均顯著高于正常對照組大鼠（N1，N3），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4種AGE-修飾蛋白的表達(dá)量在D3組均顯著高于P3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但D1組與P1組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.糖尿病大鼠血清及視網(wǎng)膜組織中AGE-修飾蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào)，且隨著糖尿病病程的延長，AGE-修飾蛋白的表達(dá)水平增加。
　　2.葛根素干預(yù)可