原花青素緩解鎘引起的雞卵巢毒性作用的研究.pdf

1、隨著科技的迅速發(fā)展，工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中出現(xiàn)了越來越多的環(huán)境污染問題，其中，鎘污染尤其對生殖系統(tǒng)，呈現(xiàn)了環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的毒性作用。本研究首先探索了氯化鎘對雌性雞胚卵巢生殖細(xì)胞減數(shù)分裂的抑制作用;其次，鑒于原花青素具有廣泛的藥理活性，能夠清除自由基，保護(hù)免疫系統(tǒng)，抗過敏、抗腫瘤，調(diào)節(jié)功能性酶等。選取了葡萄籽提取物原花青素，進(jìn)一步探索其對鎘導(dǎo)致的減數(shù)分裂抑制的緩解作用，為探明鎘的作用機(jī)制及防治提供依據(jù)。
　　1.鎘對雞卵巢發(fā)育的影響

2、　　鎘作為一種無機(jī)內(nèi)分泌干擾物，有毒重金屬的典型代表，已廣泛存在于人類日常生活環(huán)境中，造成嚴(yán)重的潛在危害。本研究以海蘭雞胚為實驗材料，隨機(jī)分為四組，每組50個胚。氯化鎘(CdCl2)采用四個劑量組，分別是0、1.5、3.0和6.0μg/枚，在性腺分化后即胚胎期E6.5進(jìn)行氣室注射，在減數(shù)分裂期E17.5、出殼或出殼后兩周取出卵巢，4％多聚甲醛固定，做石蠟切片，HE染色觀察雞胚卵巢組織形態(tài)學(xué)的變化，試驗結(jié)果表明在雞胚孵化至E17.5，卵巢

3、組織出現(xiàn)了比較明顯的發(fā)育抑制，進(jìn)入減數(shù)分裂的生殖細(xì)胞數(shù)目明顯減少。因此，取E17.5作為后續(xù)試驗的取材時間。通過卵巢重、體重、孵化率的統(tǒng)計以及HE染色、細(xì)胞凋亡檢測，免疫熒光（減數(shù)分裂γH2AX標(biāo)志蛋白的定位定量）和熒光定量PCR（基因表達(dá)量的檢測）等方法研究鎘對生殖細(xì)胞減數(shù)分裂的影響。試驗結(jié)果表明，3.0μg/枚的鎘可引起雞胚卵巢明顯的發(fā)育抑制，進(jìn)入減數(shù)分裂的生殖細(xì)胞數(shù)目顯著減少，其表現(xiàn)為卵巢重、體重均有一定的下降，孵化率也明顯降低，

4、減數(shù)分裂標(biāo)志蛋白γH2AX的表達(dá)量明顯減少，減數(shù)分裂標(biāo)志基因(Stra8，Spo11，Scp3 and Dmc1)也呈現(xiàn)了不同程度的顯著下降。同時，維甲酸信號通路也有一定程度的抑制，維甲酸合成酶Raldh2和受體(RARα、RARβ)表達(dá)量顯著下降。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，3.0μg/枚的鎘對出殼后兩周卵泡發(fā)育也有一定的抑制作用。鎘劑量組與對照組相比，生殖細(xì)胞簇內(nèi)卵母細(xì)胞的數(shù)量增多，原始卵泡的數(shù)目明顯的減少，初級卵泡的數(shù)量也有一定程度的降低。

5、以上結(jié)果表明，一定劑量的鎘可抑制卵巢生殖細(xì)胞的發(fā)育，并且可能通過抑制減數(shù)分裂的進(jìn)程，導(dǎo)致卵泡數(shù)量的減少。
　　2.原花青素對鎘引起的雞卵巢減數(shù)分裂抑制的緩解作用
　　目前，有關(guān)鎘對于雌性性腺毒性和具體的防御措施仍不清楚。前期的研究結(jié)果表明鎘能夠抑制雞胚卵巢生殖細(xì)胞的減數(shù)分裂，然而，減數(shù)分裂是生殖發(fā)育的重要過程之一，因此研究原花青素對鎘引起的減數(shù)分裂抑制的緩解作用及其機(jī)理對于保護(hù)雌性動物的卵子發(fā)生具有重要的意義。HE染色、糖原

6、染色、吉姆薩染色和免疫熒光結(jié)果表明，與對照組相比，鎘(3.0μg/枚)暴露于E6.5至E17.5，明顯降低了進(jìn)入減數(shù)分裂的生殖細(xì)胞數(shù)目，減數(shù)分裂標(biāo)志蛋白γH2AX的表達(dá)量顯著下降。相應(yīng)的，減數(shù)分裂標(biāo)志基因（Stra8，Scp3，Spo11和Dmc1）的表達(dá)也呈現(xiàn)了差異顯著性降低。同時，起始減數(shù)分裂的經(jīng)典途徑維甲酸信號通路也有一定的變化，維甲酸合成酶Raldh2和受體(RA Rα和RARβ)也呈現(xiàn)差異顯著降低，伴隨著維甲酸降解酶Cyp26