裸鼠腎癌模型中MiR-21與PDCD4相互作用的研究.pdf

1、目的：在腎細(xì)胞癌（RCC）細(xì)胞系和組織中，microRNA-21（miR-21）下調(diào)程序性細(xì)胞死亡因子4（PDCD4）抑制細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。本研究的目的是探討裸鼠腎癌模型中，PDCD4和 miR-21之間的相互作用關(guān)系和角色。
　　方法：24只雄性BALB/c裸鼠隨機(jī)分為三組（陰性對(duì)照組（n=8），miR-21 inhibitor組（n=8），miR-21 mimic組（n=8））。將786-O細(xì)胞移植到小鼠腋下，每

2、天小鼠分別注射negative control siRNA，pre-mir-21（mimic）和anti-miR-21（inhibitor）。786-O細(xì)胞移植后16天，取下荷瘤小鼠的腫瘤并稱重。另外，采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR分析腫瘤組織中miR-21和PDCD4 mRNA的表達(dá)。在腫瘤組織中PDCD4蛋白的表達(dá)，采用免疫組織化學(xué)和Western blot檢測(cè)。此外，786-O細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染PDCD4 siRNA和negative con

3、trol siRNA，采用軟瓊脂集落形成， EDU增殖實(shí)驗(yàn)和侵襲遷移實(shí)驗(yàn)研究沉默 PDCD4對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、侵襲的影響。另取16只雄性 BALB/c裸鼠隨機(jī)分為兩組：陰性對(duì)照組（ n＝8）和PDCD4 siRNA組（n=8），然后786-O細(xì)胞移植到腋下，試驗(yàn)小鼠每天分別注射negative control siRNA或PDCD4 siRNA，移植后16天，取下荷瘤小鼠的腫瘤并稱重。
　　結(jié)果：與陰性對(duì)照組相比，在miR-2

4、1 mimic組腫瘤重量明顯增加，然而，在miR-21 inhibitor組腫瘤重量顯著降低。與人腎癌組織和細(xì)胞系的結(jié)果類似，在裸鼠腎癌模型中，miR-21 mimic組中 miR-21的表達(dá)與陰性對(duì)照組相比顯著上調(diào)，然而，在miR-21 inhibitor組 miR-21的表達(dá)顯著降低。此外，觀察到在miR-21 mimic組PDCD4蛋白水平顯著減少，而在miR-21 inhibitor組顯著增加，而三組腫瘤組織中 PDCD4 mR

5、NA的表達(dá)水平?jīng)]有差異。在 EDU增殖實(shí)驗(yàn)中，陰性對(duì)照組（NC組）的增殖率為(28.6±2.3)％， PDCD4 siRNA組的增殖率為（44.7±3.6）%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)以及遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中，PDCD4 siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中克隆形成和侵襲能力顯著增加。此外，與陰性對(duì)照組相比， PDCD4 siRNA組腫瘤重量明顯增加。
　　結(jié)論：與人腎癌組織和細(xì)胞系的結(jié)果類似， miR-21在促進(jìn)腎癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增