甘草酸二銨鹽(GAS)對過氧化氫誘導的HEPG2細胞損傷的保護作用及凋亡機理的研究.pdf

1、目的：探討GAS對過氧化氫誘導的人肝癌細胞（HEPG2）損傷的保護作用以及GAS抑制HEPG2細胞凋亡的機理。
　　方法：通過MTT法確定過氧化氫誘導HEPG2細胞凋亡的最佳濃度和時間（1600μmol/L、4h），使用治療藥物GAS進行干預，通過MTT選取GAS有效作用的低中高劑量（5μmol/L、25μmol/L、125μmol/L）。將實驗分為五組，正常組、過氧化氫組、高劑量、中劑量、低劑量組。通過Hoechst33258染

2、色觀察各組細胞核形態(tài)的變化，觀察各組細胞凋亡的狀況。ALT、AST、MDA、SOD等生化試劑盒檢測各組指標含量變化，闡述GAS的抗損傷作用。通過流式細胞技術(shù)Annxin-V/FITC/PI雙染檢測各組細胞凋亡率。使用ELISA法檢測Caspase-3與Casepase-9兩種與凋亡相關的蛋白酶，Western Bl ot檢測不同組與凋亡相關的蛋白Bcl-2、Bax表達變化，最終探究GAS抑制HEPG2細胞凋亡的機理。
　　結(jié)果：濃

3、度為1600μmol·L－1過氧化氫作用的4h后鏡下觀察HEPG2細胞，結(jié)果發(fā)生細胞質(zhì)凝集，細胞核皺縮，與正常組相比Hoechst33258染色后模型組可見明顯的致密固縮形態(tài)和顆粒狀熒光；MTT檢測細胞存活率達(52.20±1.13)％，與對照組及治療組相比有顯著性(P<0.01)，表明成功建立了HEPG2細胞凋亡模型。ALT、AST、MDA、SOD等生化指標試劑盒檢測結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組ALT、AST、MDA含量升高，SOD

4、含量降低，劑量組檢測結(jié)果顯示其具有保護作用且呈劑量依賴性。使用流式細胞儀Annxin-V/FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡狀況，結(jié)果過氧化氫模型組（1600μmol/L、4h）凋亡率為（42.66±1.54）%，與正常組比較有顯著性差異(p<0.01)，結(jié)果顯示治療劑量組呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制細胞凋亡。使用ELISA法檢測Caspase-3與Casepase-9，與正常組相比，模型組兩種酶含量均顯著增加，劑量組呈現(xiàn)劑量依賴性的降低Casp

5、ase-3與Casepase-9含量，顯示GAS具有抑制細胞凋亡的作用。Western blot結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組的Bcl-2（抑凋亡蛋白）表達顯著減少，Bax（促凋亡蛋白）表達顯著增加，給藥組上調(diào)Bcl-2，下調(diào)Bax的含量，呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制HEPG2的凋亡。
　　結(jié)論：本實驗條件下過氧化氫（1600μmol/L、4h）可引起HEPG2細胞的損傷，并且發(fā)生凋亡，GAS可保護HEPG2細胞，減輕損傷，抑制凋亡。各蛋