唐氏綜合征母體胎源性CircRNA差異性表達譜及功能分析.pdf

1、單位代碼10602學號20140“093分類號R34密級公開碩士學位論文唐氏綜合征母體胎源性CircRNA差異性表達譜及功能分析DifferentialExpressionProfileandGeneFunctionAnalysisofMaternalFetalDerivedCircRNAforDown’sSyndrome學院專業(yè)研究方向年級研究生指導教師完成日期：生命科學學院：生物學：生物化學與分子生物學：2014級：常燕：楊明(主任

2、醫(yī)師)戴勇(教授)：2017年4月學一戈垤70洲每址節(jié)一廟刪店一◎IIIIIIIIIIIIIIlitIIIIIIIIIIIIY3261069唐氏綜合征母體胎源性CircRNA差異性表達譜及功能分析研究生：常燕年級：2014級導師：楊明(主任醫(yī)師)戴勇(教授)學科專業(yè)：生物學研究方向：生物化學與分子生物學摘要唐氏綜合征(DownSyndrome。DS)，也被稱為21三體綜合征，由第21號染色體多了一份拷貝而引起，它是常染色體數(shù)目異常引起的

3、最常見的出生缺陷疾病。DS患者一般均具有較為常見的臨床表現(xiàn)，包括輕度至中度學習障礙、顱面異常、體格發(fā)育遲緩等，并常伴有免疫力低下、先天性心臟病、白血病以及早期出現(xiàn)的阿爾茲海默病等。DS給家庭和社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。目前，避免DS患兒出生的唯一醫(yī)療手段是對孕婦進行全面的產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷。然而，傳統(tǒng)的產(chǎn)前篩查具有檢出率低、漏檢率和假陽性率相對較高的缺點，胎兒染色體產(chǎn)前診斷相關(guān)方法則因為侵入式取樣的于段容易產(chǎn)生出血、流產(chǎn)或患有其它并發(fā)癥

4、。而已有的無創(chuàng)性的產(chǎn)前診斷方法又存在步驟繁瑣、成本較高等問題。因此，基于傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷的缺陷，以及已有無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法不足的現(xiàn)狀，探索新的無創(chuàng)性唐氏綜合征胎兒產(chǎn)前診斷標志物具有非常重要的意義。目的：本研究擬從circRNA為切入點，利用基因芯片技術(shù)從妊娠有唐氏綜合征胎兒孕婦和正常胎兒孕婦的臍帶血中篩選出差異性表達的circRNA，并采用RTPCR技術(shù)對篩選出的胎源性差異表達的circRNA在外周血中進行驗證，以尋找潛在的標志物

5、：同時利用相同的方法篩選差異表達mRNA，對circRNA與mRNA進行關(guān)聯(lián)分析，并通過基因信息生物學對差異基因進行功能分析，為建立新的無創(chuàng)性DS胎兒產(chǎn)前篩查診斷新方法提供依據(jù)。方法：選取12例孕婦臍帶血標本(其中包括6例經(jīng)G顯帶染色體核型分析確診為標準型唐氏綜合征胎兒的臍帶血標本以及6例健康胎兒臍帶血)，利用Trizol法提取總RNA，使用NanoDropND1000檢測RNA是否降解并測定RNA濃度；采用Agilent表達譜芯片分析

6、樣本中的circRNA、mRNA差異表達譜；應(yīng)用RTPCR驗證差異表達的circRNA和mRNA在唐氏綜合征患兒以及健康兒童外周血中的表達情況：并使用Arraystar的自制miRNA靶基因預測軟件對circRNA上的miRNA結(jié)合位點進行預測；最后采用上述Agilent公司檢測的circRNA和mRNA表達譜芯片數(shù)據(jù)，對篩選出的DS母體胎源性差異表達circRNA表達譜和mRNA基因表達譜信息進行整合分析，尋找circRNA與rnRN