鹿血晶對(duì)荷瘤鼠放療后免疫功能的影響.pdf

1、目的:
　　迄今為止，惡性腫瘤仍舊是影響人類生命健康和生活質(zhì)量的一類嚴(yán)重疾病，是人類疾病中的第二大殺手，手術(shù)、化療、放療是其治療的三大基本手段。多數(shù)腫瘤要依靠放射治療，但放療缺乏對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的選擇性，射線在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)于正常細(xì)胞也存在殺傷作用，從而產(chǎn)生毒副作用，使得其存在極大的局限性，最為常見也最為關(guān)鍵的就是導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，嚴(yán)重影響患者的治療效果和生存質(zhì)量。因此，在腫瘤治療的過(guò)程中，殺死腫瘤細(xì)胞和保護(hù)機(jī)體免疫

2、系統(tǒng)同等重要。中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥雖在控制腫瘤方面欠佳，但多數(shù)具有增強(qiáng)免疫、降低毒副作用的功效，且較為安全，在放療輔助治療上具備獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。鹿血晶系梅花鹿血或馬鹿血經(jīng)炮制加工干燥后制得的產(chǎn)品，具有養(yǎng)血益精、行血祛瘀、消腫療傷等作用。本文旨在通過(guò)觀察外周血象、脾臟和骨髓組織形態(tài)、T細(xì)胞亞群及相關(guān)蛋白等的變化，評(píng)價(jià)鹿血晶對(duì)荷瘤鼠放療后免疫功能的影響，并初步探討其可能機(jī)制，為臨床用藥提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.制備S180腹水瘤細(xì)胞懸

3、液，建立S180荷瘤鼠模型。
　　2.分組和給藥。設(shè)置正常組、荷瘤模型組、放療組、放療+鹿血晶組。對(duì)治療組進(jìn)行X線局部照射，10 Gy/5次，2 Gy/次，每天1次，連續(xù)5天。放療+鹿血晶組自照射開始即灌胃給予鹿血晶混懸液，連續(xù)給藥10天，于開始給藥后第16天處死。
　　3.在治療期間觀察小鼠的一般情況和腫瘤生長(zhǎng)情況，并定期檢測(cè)小鼠外周血血象，觀察各組小鼠在治療期間血象的變化。
　　4.治療結(jié)束后將小鼠處死，鈍性剝離脾

4、臟和同側(cè)股骨制作標(biāo)本，稱取脾重，計(jì)算脾臟指數(shù)；制備抗凝血，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠外周血的T淋巴細(xì)胞亞群CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞。
　　5.采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）雙抗體夾心法檢測(cè)各組小鼠外周血血清中細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-1表達(dá)水平。
　　6.采用免疫組化法檢測(cè)各組小鼠脾臟組織中轉(zhuǎn)錄因子GATA3和T-bet的表達(dá)。
　　7.采用HE染色技

5、術(shù)，觀察各組小鼠脾臟和骨髓的組織形態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　1.荷瘤鼠接受照射后體重呈下降趨勢(shì)，給藥后體重下降幅度減小，腫瘤增長(zhǎng)也較放療組減緩。
　　2.治療期間外周血血象檢測(cè)結(jié)果表明，與模型組相比，開始照射后5天，放療組的白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)均降低，給鹿血晶后白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)有回升趨勢(shì)，其中與模型組相比，各治療組淋巴細(xì)胞數(shù)變化顯著（P<0.05）；尤其第10天，與模型組相比，放療組和放療+鹿血晶組的白細(xì)胞數(shù)

6、、淋巴細(xì)胞數(shù)均顯著下降（P<0.01），且第10天和第15天荷瘤鼠放療+鹿血晶組的淋巴細(xì)胞數(shù)較放療組明顯升高（P<0.05）。
　　3.對(duì)脾臟指數(shù)的影響：與模型組相比，放療組的脾臟指數(shù)有所降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與放療組比較，鹿血晶對(duì)放療荷瘤鼠放療后脾臟指數(shù)的升高作用明顯（P<0.01）。
　　4.外周血 T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果表明，與模型組相比，放療后荷瘤鼠 CD4+輔助性 T細(xì)胞亞群、CD8+殺傷性 T細(xì)胞亞群以及 CD4+/

7、CD8+的比例均下降（P<0.05）；與放療組相比，鹿血晶對(duì)荷瘤鼠放療后外周血中 CD4+輔助性 T細(xì)胞亞群的數(shù)量有增強(qiáng)作用，CD4+/CD8+比例也增加（P<0.01）。
　　5.外周血細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果表明，荷瘤鼠放療后外周血的 IFN-γ表達(dá)減少（P<0.05），給藥后較放療組荷瘤鼠外周血IFN-γ水平升高（P<0.05）；放療荷瘤鼠外周血的IL-4表達(dá)水平上升（P<0.05），與放療組荷瘤鼠相比，給藥后荷瘤鼠外周血IL-4表

8、達(dá)降低（P<0.05）。放療組較模型組荷瘤鼠外周血的IL-6、IL-1表達(dá)均有增加趨勢(shì)，給藥后呈下降趨勢(shì)，但差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　6.免疫組化法檢測(cè)各組小鼠脾臟組織中轉(zhuǎn)錄因子GATA3與T-bet表達(dá)，結(jié)果表明，與模型組相比，放療組和放療+鹿血晶組T-bet和GATA3表達(dá)均降低，放療組T-bet表達(dá)比GATA3降幅更大，GATA3表達(dá)占優(yōu)勢(shì)，給藥后GATA3表達(dá)明顯降低（P<0.01），T-bet表達(dá)上升。說(shuō)

9、明鹿血晶能緩解放療造成的荷瘤鼠脾臟組織中T-bet/GATA3的比值降低，使T-bet表達(dá)占優(yōu)勢(shì)。
　　7.病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，給藥后放療組荷瘤鼠的脾臟、骨髓組織形態(tài)學(xué)損傷減輕。
　　結(jié)論：
　　鹿血晶對(duì)放療引起的荷瘤鼠血象損傷尤其是T淋巴細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用，能夠緩解放療引起的體重減輕以及脾臟、造血功能損傷，并能通過(guò)調(diào)節(jié)CD4+/CD8+T細(xì)胞比例、平衡Th1/Th2型細(xì)胞因子，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能。部分機(jī)制可