慢性心力衰竭患者血清miRNAs及血紅素氧合酶-1的變化及意義.pdf

1、引言：
　　心力衰竭是各種心臟疾病的最終結(jié)局，盡管心力衰竭的治療近年出現(xiàn)了快速發(fā)展，但死亡率仍居高不下，尤其是對(duì)終末期心力衰竭缺乏明確有效的治療方法。近年研究發(fā)現(xiàn)，在慢性心衰過(guò)程中，有多種miRNAs的表達(dá)上調(diào)。MiRNAs在循環(huán)血中能穩(wěn)定存在，可以方便快速的非侵入性檢測(cè)，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，可能成為新的診斷標(biāo)志物，或作為藥物治療靶點(diǎn)為心臟疾病治療研究新的藥物。但目前有關(guān)miRNAs在心血管系統(tǒng)疾病中的作用還知之甚少，尤其在心

2、力衰竭不同時(shí)期miRNAs水平的變化如何報(bào)道少見(jiàn)。
　　心力衰竭的機(jī)制之一是心肌細(xì)胞的凋亡，HO-1/CO-膽紅素系統(tǒng)具有抗氧化、抗凋亡的作用，有研究提示在心衰的病理生理過(guò)程中HO-1/CO-膽紅素系統(tǒng)可能起保護(hù)作用，但是在心力衰竭的不同時(shí)期血紅素氧合酶-1尚不清楚。
　　為此，我們通過(guò)檢測(cè)慢性心力衰竭患者血清miRNAs及血紅素氧合酶-1的變化，以探討慢性心力衰竭患者基因表達(dá)調(diào)控及神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的改變與心功能的關(guān)系。

3、>　　論文Ⅰ慢性心力衰竭患者血清miRNAs的變化及與心功能的關(guān)系
　　背景及目的：
　　MiRNAs(microRNAs)是一類長(zhǎng)度大約為18-24個(gè)核苷酸序列的內(nèi)源性小RNA，通過(guò)與靶mRNA的3'非編碼區(qū)結(jié)合，阻止該段基因的蛋白表達(dá)。目前認(rèn)為，人類絕大部分的蛋白編碼基因都有其靶向miRNA與之相對(duì)應(yīng)。其性質(zhì)高度保守，在血清中可以穩(wěn)定存在，在各種生理及病理生理過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。國(guó)外有研究報(bào)道，一些miRNAs在

4、慢性心力衰竭的動(dòng)物模型中有表達(dá)水平的升高，在慢性心衰患者血清中表達(dá)也有升高，但心力衰竭不同的時(shí)期miRNAs水平的變化如何以及與現(xiàn)有的檢測(cè)方法相關(guān)性目前報(bào)道少見(jiàn)。
　　本研究旨在通過(guò)檢測(cè)慢性心力衰竭患者血清中的miRNAs水平來(lái)探討其在慢性心力衰竭患者中的變化及意義。
　　方法：
　　1、選取慢性心力衰竭患者147例（心衰組），依據(jù)NYHA心功能分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)患者的心功能，將心衰組分為4個(gè)亞組:心衰Ⅰ亞組(NYHAⅠ級(jí)3

5、5例)、心衰Ⅱ亞組(NYHAⅡ級(jí)38例)、心衰Ⅲ亞組(NYHAⅢ級(jí)34例)、心衰Ⅳ亞組(NYHAⅣ級(jí)40例)。同時(shí)選取我院體檢中心同期體檢健康正常者30例（對(duì)照組）。
　　2、血清miRNA提取試劑盒提取miRNA，通過(guò)qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)血清miR-181c-5p、miR-214-3p、miR-423-5p的相對(duì)水平。
　　3、電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清N末端腦鈉肽(NT-proBNP)，羅氏CobasE601免疫分析儀檢測(cè)血

6、清hs-cTnT，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、血脂、血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐等生化指標(biāo)，化學(xué)發(fā)光法測(cè)游離三碘甲狀腺原氨酸、游離甲狀腺素水平。
　　4、采用PHILIPSIE33彩色多普勒血流儀雙平面Simpson法測(cè)量心臟參數(shù):左心房?jī)?nèi)徑(LAd)、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)及左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。
　　結(jié)果：
　　1、各組患者miRNAs表達(dá)水平的比較
　　①

7、各組患者miR-423-5p表達(dá)水平的比較
　　心衰組較對(duì)照組血清miR-423-5p表達(dá)水平顯著升高（5.41±0.78vs4.97±0.56）（P＜0.05）;心衰Ⅳ亞組血清miR-423-5p表達(dá)水平較心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組有顯著差異（6.21±0.67，5.05±0.49，5.11±0.53，5.19±0.51）（P＜0.05），對(duì)照組、心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組之間比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　?、诟鹘M患者miR-18

8、1c-5p表達(dá)水平的比較
　　心衰組較對(duì)照組血清miR-181c-5p表達(dá)水平（1.67±0.39vs1.61±0.42）以及心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亞組之間血清miR-181c-5p表達(dá)水平均無(wú)顯著性差異(1.68±0.38，1.63±0.40,1.74±0.39,1.75±0.43)(P＞0.05)。
　?、鄹鹘M患者miR-214-3p表達(dá)水平的比較
　　心衰組較對(duì)照組血清miR-214-3p表達(dá)水平（1.86±0.44

9、vs1.86±0.38）以及心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亞組之間血清miR-214-3p表達(dá)水平（1.87±0.37，1.98±0.41，2.00±0.39，2.03±0.42），均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　2、心衰組患者血清miR-423-5p表達(dá)水平與NT-proBNP濃度、hs-cTnT濃度、LAd、LVEDd、LVEF的相關(guān)分析
　　miR-423-5p表達(dá)水平與NT-proBNP、hs-cTnT呈正相關(guān)(r分別為:

10、0.562，0.543，P＜0.01)（Spearman相關(guān)）;與LAd、LVEDd無(wú)明顯相關(guān)(r分別為:0.290，0.268，P＜0.01)（Pearson相關(guān)），與LVEF無(wú)明顯相關(guān)（r=-0.271，P＜0.05）（Spearman相關(guān)）。
　　3、miR-423-5p的ROC曲線下面積:AUC=0.714(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、慢性心力衰竭終末期患者血清miR-423-5p水平升高，能較好反映

11、心功能狀況，但血清miR-423-5p水平在心力衰竭早期無(wú)變化。
　　2、在慢性心力衰竭患者血清miR-181，miR-214水平無(wú)變化。
　　論文Ⅱ血紅素氧合酶-1在慢性心力衰竭患者中的變化及其意義
　　背景及目的：
　　血紅素氧合酶1(hemeoxygenase-1，HO-1)是血紅素代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶，可以催化血紅素分解產(chǎn)生一氧化碳（carbonmonoxide，CO）、亞鐵離子(Fe2+)和膽綠素，膽綠素

12、可進(jìn)一步還原生成膽紅素。近年研究證實(shí)，HO-1/CO-膽紅素系統(tǒng)具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、擴(kuò)血管等作用，對(duì)心血管系統(tǒng)有重要的保護(hù)意義，有研究提示在心力衰竭時(shí)HO-1/CO-膽紅素系統(tǒng)可能被激活，在心衰的病理生理過(guò)程中起到保護(hù)作用，影響患者預(yù)后。但是在心力衰竭的不同時(shí)期HO-1/CO-膽紅素系統(tǒng)的變化如何目前尚不清楚。
　　本研究通過(guò)檢測(cè)慢性心力衰竭患者血清HO-1的表達(dá)水平來(lái)探討其在慢性心力衰竭患者中的變化及意義。
　　方法

13、：
　　1、選取慢性心力衰竭患者147例（心衰組），依據(jù)NYHA心功能分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)患者的心功能，將心衰組分為4個(gè)亞組:心衰Ⅰ亞組(NYHAⅠ級(jí)35例)、心衰Ⅱ亞組(NYHAⅡ級(jí)38例)、心衰Ⅲ亞組(NYHAⅢ級(jí)者34例)、心衰Ⅳ亞組(NYHAⅣ級(jí)40例)。同時(shí)選取我院體檢中心同期體檢健康正常者30例（對(duì)照組）。
　　2、人血紅素氧合酶(HO-1)ELISA試劑盒檢測(cè)血清HO-1表達(dá)水平。
　　3、電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清N

14、末端腦鈉肽(NT-proBNP)，羅氏CobasE601免疫分析儀檢測(cè)血清hs-cTnT，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、血脂、血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐等生化指標(biāo)，化學(xué)發(fā)光法測(cè)游離三碘甲狀腺原氨酸、游離甲狀腺素水平。
　　4、采用PHILIPSIE33彩色多普勒血流儀雙平面Simpson法測(cè)量心臟參數(shù):左心房?jī)?nèi)徑(LAd)、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)及左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。
　

15、　結(jié)果：
　　1、各組患者血清HO-1表達(dá)水平（ng/mL）的比較
　　心衰組較對(duì)照組血清HO-1表達(dá)水平顯著升高（19.1±3.6vs15.9±4.0）(P＜0.05);心衰Ⅳ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（24.7±3.7，15.8±3.9，16.7±3.5，20.3±3.3）(P＜0.05);心衰Ⅲ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（20.3±3.3，15.8±3.9，16.7±3.5）（P＜0.05）。心

16、衰Ⅰ、Ⅱ亞組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(15.8±3.9,16.7±3.5,15.9±4.0)(P＞0.05)。
　　2、各組患者TBIL、DBIL、IBIL(μmol/L)濃度的比較
　?、傩乃ソM較對(duì)照組TBIL顯著升高（27.3±6.5vs17.4±5.4）(P＜0.05);心衰Ⅳ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（37.7±4.5，18.6±5.3，20.1±5.5，28.7±4.2）(P＜0.05);心衰Ⅲ亞

17、組較心衰Ⅰ、Ⅱ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(28.7±4.2，18.6±5.3，20.1±5.5)（P＜0.05）。心衰Ⅰ、Ⅱ亞組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(18.6±5.3，20.1±5.5，17.4±5.4)(P＞0.05)。
　?、谛乃ソM較對(duì)照組DBIL顯著升高（7.1±3.2vs4±1.9）(P＜0.05);心衰Ⅳ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（8.2±2.0，4.2±2.0，4.8±1.9，6.9±1.6）(P＜0.

18、05);心衰Ⅲ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（6.9±1.6，4.2±2.0，4.8±1.9）（P＜0.05）。心衰Ⅰ、Ⅱ亞組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（4.2±2.0，4.8±1.9，4.0±1.9）(P＞0.05)。
　?、坌乃ソM較對(duì)照組IBIL顯著升高（20.2±7.5vs14.0±4.8）(P＜0.05);心衰Ⅳ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（29.5±4.7，14.4±4.5，15.3±5.0，21.8

19、±4.4）(P＜0.05)，心衰Ⅲ亞組較心衰Ⅰ、Ⅱ亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（21.8±4.4，14.4±4.5，15.3±5.0）(P＜0.05)。心衰Ⅰ、Ⅱ亞組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(14.4±4.5，15.3±5.0,14.0±4.8)(P＞0.05)。
　　3、心衰患者血清HO-1水平與TBIL、DBIL、IBIL、NT-proBNP、hs-cTnT濃度、LVEF、LAd、LVEDd相關(guān)分析
　　心衰患者血清HO-1

20、濃度與TBIL、DBIL、IBIL均呈正相關(guān)（Pearson相關(guān)）(r分別為:0.572，0.562，0.518，P＜0.01);與NT-proBNP濃度濃度呈正相關(guān)(r=0.559，P＜0.01)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)(r=-0.600，P＜0.01);與hs-cTnT濃度無(wú)明顯相關(guān)(r=0.480，P＜0.01)（Spearman相關(guān)）;與Lad、LVEDd無(wú)明顯相關(guān)(r分別為0.342，0.342，P＜0.01)（Pearson相關(guān)