RANTES、EOS對哮喘氣道炎癥的影響及苗藥熱咳喘干預(yù)的臨床與實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本課題通過動物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察，了解RANTES、EOS在哮喘患者血清和哮喘大鼠肺組織和氣道中的表達(dá)及苗藥熱咳喘對其干預(yù)的影響，探討RANTES、EOS的表達(dá)與哮喘急性發(fā)作的相關(guān)性及苗藥熱咳喘對二者的調(diào)控作用，對研究哮喘氣道炎癥的產(chǎn)生機(jī)制和以苗藥熱咳喘為基礎(chǔ)方的新藥研發(fā)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　方法:將60只健康雄性Sprague Dawly(SD)大鼠，隨機(jī)平均分為正常組、模型組、熱咳喘組、地塞米松組，每組各15只。除正常組

2、外，其余各組均制成支氣管哮喘模型。正常組用生理鹽水造模，其余組每只大鼠用10％卵蛋白生理鹽水抗原液(內(nèi)含卵蛋白(OVA)100mg，氫氧化鋁(Al(OH)3)100mg，滅活百日咳菌苗5×109個(gè)）1ml，分別第1天、8天腹腔注射致敏，從第15天起正常組用等量生理鹽水、其余各組用5％OVA溶液15ml連續(xù)霧化2周激發(fā)，每次半小時(shí)，熱咳喘組、地塞米松組每日霧化激發(fā)前1小時(shí)分別予熱咳喘膠囊1.05g/kg灌胃，地塞米松1mg/kg腹腔注射，

3、正常組給予同等量生理鹽水灌胃，末次激發(fā)后6小時(shí)內(nèi)處死各組大鼠，在超凈工作臺內(nèi)以無菌器械取右肺肺組織及氣道標(biāo)本，左肺抽取肺泡灌洗液，分別進(jìn)行蘇木素-伊紅(hematoxylineosin，HE)染色觀察肺組織病理變化及炎癥細(xì)胞浸潤情況，通過免疫組化法檢測RANTES在各組大鼠肺組織及氣道不同部位的表達(dá)情況;通過ELISA法檢測各組大鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid BALF)中RANTES的含量，通過

4、Wright染色法計(jì)數(shù)各組大鼠肺泡灌洗液(BALF)中EOS數(shù)量;將符合“納入標(biāo)準(zhǔn)”的60例研究對象，其中哮喘熱哮患者40例，隨機(jī)分為常規(guī)組、熱咳喘組，健康志愿者20例為正常組。其中常規(guī)組予西醫(yī)常規(guī)治療包括解痙平喘、氧療、控制呼吸道感染、祛痰止咳;熱咳喘組在上述治療基礎(chǔ)上給予苗藥熱咳喘膠囊口服。上述治療共7天。正常組不予治療，入組時(shí)僅做一次檢測。采用ELLSA法檢測治療前各組及治療后常規(guī)治療組和熱咳喘組血清中RANTES的水平，同時(shí)檢測

5、外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(EOS)，記錄哮喘患者治療前后的癥狀體征積分變化，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:動物實(shí)驗(yàn):1、HE染色病理圖片:正常組支氣管壁結(jié)構(gòu)光滑完整，肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管粘膜上皮完整，粘膜無明顯水腫，未見炎癥細(xì)胞浸潤;模型組支氣管粘膜下和血管周圍可見大量以嗜酸性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤，支氣管管壁增厚、管腔狹窄，氣道平滑肌和網(wǎng)狀基底膜增厚，形狀不規(guī)則，斷裂，氣道內(nèi)上皮細(xì)胞脫落，粘膜下水腫明顯，粘液腺增生，分泌物增多;熱咳

6、喘組、地塞米松組較模型組炎細(xì)胞浸潤、平滑肌的斷裂明顯減少。
　　2、大鼠肺組織及氣道不同部位RANTES的表達(dá):RANTES主要表達(dá)在氣道平滑肌細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞的胞漿中，各組大鼠均見有棕黃色顆粒表達(dá)，其中正常組棕黃色顆粒少、染色淺、表達(dá)最弱，光密度值最小，模型組棕黃色顆粒最多，染色深，表達(dá)最強(qiáng)，光密度值最大，差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，熱咳喘組、地塞米松組棕黃色顆粒數(shù)量較模型組少、染色較模型組弱，光密度值小于較哮喘

7、組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);熱咳喘組光密度值表達(dá)強(qiáng)于地塞米松組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3、肺泡灌洗液中RANTES的含量:正常組BALF中RANTES的含量最低，模型組明顯升高，差異具有非常統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，地塞米松組、熱咳喘與模型組比較，二組RANTES含量均低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。地塞米松組RANTES含量低于熱咳喘組，但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

8、>　　4、肺泡灌洗液中EOS計(jì)數(shù):正常組肺泡灌洗液中EOS計(jì)數(shù)明顯低于模型組，差異有顯著性(P＜0.01)，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;熱咳喘組、地塞米松組與模型組比較，二組EOS計(jì)數(shù)均少于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，地塞米松組EOS數(shù)量低于熱咳喘組，但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。臨床觀察:1、各組患者血清中RANTES的表達(dá)水平:治療前:正常組的RANTES表達(dá)水平最低，常規(guī)組和熱咳喘組RANTES表達(dá)水平均高于正常

9、組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但兩組比較無明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后:常規(guī)組和熱咳喘組RANTES表達(dá)水平較治療前均明顯下降(P＜0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中熱咳喘組RANTES表達(dá)水平下降較常規(guī)組明顯(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、常規(guī)組和熱咳喘組治療前后外周血EOS計(jì)數(shù)比較:兩組患者經(jīng)治療后EOS計(jì)數(shù)量均低于治療前(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，熱咳喘組較常規(guī)治療組EOS數(shù)量下降明顯(P

10、＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、常規(guī)組和熱咳喘組治療前后主要癥狀、體征平均積分比較.兩組患者治療前后癥狀體征平均積分、癥狀體征平均總積分比較(P＜0.05)，有顯著差異，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療后熱咳喘組較常規(guī)組癥狀體征改善明顯，兩組患者癥狀體征平均積分、癥狀體征平均總積分比較(P＜0.05)，存在差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、中醫(yī)證候療效比較兩組患者治療前后中醫(yī)證候療效比較(P＜0.05)，有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療后熱咳喘組較常

11、規(guī)組總有效率高，(P＜0.05)，存在差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:1.動物實(shí)驗(yàn)顯示熱咳喘組、地塞米松組肺組織炎癥細(xì)胞浸潤明顯低于模型組，說明熱咳喘、地塞米松二者均能能減輕氣道炎癥反應(yīng)。
　　2.動物實(shí)驗(yàn)顯示RANTES在模型組大鼠肺組織及氣道的表達(dá)、肺泡灌洗液中的含量最高，同時(shí)肺泡灌洗液中EOS數(shù)量也最多;說明RANTES、EOS與哮喘氣道炎癥發(fā)生呈正相關(guān)。熱咳喘組、地塞米松組RANTES在大鼠肺組織及氣道、肺泡灌洗

12、液中含量、EOS數(shù)量較模型組明顯減少，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤明顯改善，說明二者有可能通過調(diào)節(jié)RANTES的表達(dá)、降低EOS數(shù)量來減輕哮喘大鼠氣道炎癥。
　　3.臨床觀察顯示熱咳喘組在改善哮喘患者癥狀體征及中醫(yī)證候療效方面優(yōu)于常規(guī)組，說明苗藥熱咳喘與西醫(yī)常規(guī)聯(lián)合用藥能進(jìn)一步改善哮喘臨床癥狀、體征，提高臨床療效。
　　4.臨床觀察顯示RANTES在血清中表達(dá)水平及外周血EOS數(shù)量在正常組最低，治療前常規(guī)組、熱咳喘組血清中RANTES