人臍帶MSCs移植對(duì)不可逆性梗阻性腎損傷模型大鼠治療作用的研究.pdf

1、目的:從形態(tài)學(xué)及細(xì)胞免疫表型兩個(gè)方面評(píng)判組織塊貼壁法分離人臍帶MSCs的可行性及生化功能的完好性，從生化指標(biāo)（血胱抑素C、血肌酐值水平）、腎組織切片HE染色以及腎組織中VEGF、CTGF兩項(xiàng)纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)水平三個(gè)不同角度研究人臍帶MSCs移植對(duì)不可逆性梗阻性腎損傷的治療和改善作用，為人臍帶MSCs在梗阻性腎病的臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和理論支撐。
　　方法:
　　1運(yùn)用組織塊貼壁法分離新鮮臍帶的MSCs，在光鏡下觀察提

2、取的人臍帶MSCs的細(xì)胞形態(tài)，運(yùn)用流式細(xì)胞檢測(cè)儀測(cè)定細(xì)胞的免疫表型。
　　2選取清潔級(jí)大鼠90只，隨機(jī)分成模型組（單側(cè)輸尿管梗阻組，n=30，大鼠行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，術(shù)后10天尾靜脈注射生理鹽水1ml），治療組（單側(cè)輸尿管梗阻+人臍帶MSCs移植組，n=30，大鼠行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，術(shù)后10天尾靜脈注射含1×107MSCs的生理鹽水1ml）和對(duì)照組（假手術(shù)組，n=30，分離右輸尿管但不結(jié)扎輸尿管，術(shù)后10天經(jīng)尾靜脈注生理鹽水1ml

3、）。三組大鼠分別于人臍帶MSCs移植后1周、2周、4周共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取10只，抽血后處死取腎標(biāo)本，行血胱抑素C水平、血肌酐值的測(cè)定，腎組織切片HE染色的觀察以及腎組織中VEGF、CTGF兩項(xiàng)纖維化相關(guān)分子在Western Blot檢測(cè)中的表達(dá)水平的研究。
　　3實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用SPSS Statistics19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P=0.05。
　　結(jié)果:
　　1組

4、織塊貼壁法提取的人臍帶MSCs，在顯微鏡下可觀察到與成纖維細(xì)胞形態(tài)相似的細(xì)胞。流式細(xì)胞檢測(cè)示分離細(xì)胞表達(dá)CD90、CD73、CD105而不表達(dá)CD19、CD34、CD45、CD116及HLA-DR，其免疫表型符合人間充質(zhì)干細(xì)胞特征。
　　2在人臍帶MSCs移植后不同時(shí)間點(diǎn)，模型組和治療組大鼠同組間測(cè)得的血肌酐值和血胱抑素C水平均有顯著差異(P＜0.05)，而在同一時(shí)間點(diǎn)三組間的這兩項(xiàng)指標(biāo)亦有明顯的差異(P＜0.05)。
　　

5、3在人臍帶MSCs移植后不同時(shí)間點(diǎn)，治療組與模型組的腎組織病理改變均表現(xiàn)為明顯的腎小管空泡樣擴(kuò)張、炎性細(xì)胞浸潤和間質(zhì)纖維化改變。組織病理學(xué)評(píng)分方面，模型組在移植后早期相對(duì)較輕，而2W后則持續(xù)惡化(P＜0.05)。此外，治療組病理損傷嚴(yán)重程度明顯較同一時(shí)間點(diǎn)的模型組輕，但是在2W后也出現(xiàn)惡化趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　4模型組VEGF蛋白表達(dá)水平隨時(shí)間進(jìn)展呈先增加后減少趨勢(shì)，且在人臍帶MSCs移植后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平均較對(duì)照組強(qiáng)(

6、P＜0.05)，治療組在移植后1W時(shí)VEGF蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增強(qiáng)，在2W時(shí)到達(dá)頂峰，之后再度出現(xiàn)下降且在4W時(shí)弱于同組1W時(shí)表達(dá)量(P＜0.05)。
　　5對(duì)照組CTGF蛋白表達(dá)水平最弱(P＜0.05)，模型組與治療組均在移植后1W時(shí)的表達(dá)量最高，往后隨時(shí)間進(jìn)展呈遞減趨勢(shì)，至移植后4W達(dá)最低水平(P＜0.05)，但無論在移植后哪個(gè)時(shí)間點(diǎn)，治療組CTGF蛋白表達(dá)水平始終較模型組弱(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　

7、　1組織塊貼壁法提取人臍帶MSCs具有可行性，獲取的MSCs在傳代培養(yǎng)、分化和免疫等功能的發(fā)揮上也具有充分的優(yōu)勢(shì)。
　　2人臍帶MSCs移植能夠幫助改善不可逆性梗阻性腎損傷的腎功能，降低血肌酐值和血胱抑素C水平。血胱抑素C水平與血肌酐值水平均可作為評(píng)價(jià)梗阻性腎病病情發(fā)展及改善的指標(biāo)，兩項(xiàng)指標(biāo)變化趨勢(shì)基本一致，且血胱抑素C水平敏感性較血肌酐值更優(yōu)。
　　3人臍帶MSCs移植對(duì)于治療不可逆性梗阻性腎損傷有效，可以減輕管周間質(zhì)的炎

8、性浸潤，抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡以及幫助腎小管上皮細(xì)胞的修復(fù)，且在治療早期（移植后約2W內(nèi)）效果最佳，單次注射后明顯治療效果一般持續(xù)至2W左右，維持療效需多次注射。
　　4 VEGF、CTGF的表達(dá)水平與梗阻性腎病間質(zhì)纖維化進(jìn)展程度具有相關(guān)性。其中，VEGF表達(dá)水平與纖維化程度負(fù)相關(guān)，CTGF表達(dá)水平與纖維化程度正相關(guān)。梗阻性腎損傷時(shí)，腎臟本身具有調(diào)節(jié)代償及自我修復(fù)作用，但始終無法阻止腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。人臍帶MSCs具有顯著的促腎