重組人促紅細胞生成素通過PI3K-Akt通路影響早產兒腦損傷模型血管新生反應的研究.pdf

1、目的:
　　1.探討rh-EPO干預早產兒腦損傷模型是否通過激活PI3K/Akt信號通路影響CD34蛋白以及CD34+細胞計數。
　　2.探討rh-EPO干預早產兒腦損傷模型是否通過激活PI3K/Akt信號通路影響VEGFR2蛋白、VEGF以及Ang-1的基因表達變化。
　　方法:
　　取生后第5日的SD幼鼠，隨機分為五大組（每亞組6只），建立早產兒腦損傷模型并給予相應的干預:(1)假手術組(Ⅰ):僅游離右側頸總

2、動脈后縫合皮膚;(2)缺氧缺血+生理鹽水組(Ⅱ):游離右側頸總動脈并結扎后縫合皮膚，返籠恢復1小時后，腹腔注射生理鹽水后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經腦定位儀于右側腦室注射生理鹽水;(3)缺氧缺血+抑制劑組(Ⅲ):游離右側頸總動脈并結扎后縫合皮膚，返籠恢復1小時后，腹腔注射生理鹽水后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經腦定位儀于右側腦室注射PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002;(4)缺氧缺血+rh-EPO組(Ⅳ):游離右側頸總動脈并結扎

3、后縫合皮膚，返籠恢復1小時后，腹腔注射rh-EPO后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經腦定位儀于右側腦室注射生理鹽水;(5)缺氧缺血+rh-EPO+抑制劑(Ⅴ):游離右側頸總動脈并結扎后縫合皮膚，返籠恢復1小時后，腹腔注射rh-EPO后缺氧2小時，缺氧環(huán)境取出后經腦定位儀于右側腦室注射PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002。90只幼鼠分別于術后15、30、90min取右側大腦行Western blot半定量檢測p-Akt。另外90只幼

4、鼠于術后2天取右側大腦Western blot檢測CD34、VEGFR2蛋白，同時行免疫熒光檢測CD34+細胞計數，qRT-PCR檢測VEGF、Ang-1 mRNA水平。
　　結果:
　　1.在術后15分鐘組，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的p-Akt比Ⅰ稍高(P＜0.05);Ⅳ、Ⅴ的p-Akt高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(P＜0.05)。在術后30、90分鐘組，Ⅳ組的p-Akt蛋白表達量明顯高于其他四組(P＜0.05);Ⅱ組的p-Akt蛋白表達量稍高于

5、Ⅰ組（P＜0.05）。組Ⅳ的p-Akt在術后30min高于術后15min(P＜0.05)。
　　2.在術后2天，CD34的蛋白表達量以及CD34+細胞計數在Ⅳ組均明顯高于其他四組(P＜0.05);Ⅱ組的稍高于Ⅰ組(P＜0.05);組Ⅰ與組Ⅲ相比，差異無統(tǒng)計學意義。VEGFR2蛋白表達量在術后2天的變化趨勢與CD34蛋白變化趨勢一致。VEGF、Ang-1的基因表達水平在Ⅳ組均明顯高于其他四組(P＜0.05);Ⅱ組的稍高于Ⅰ組（P＜0

6、.05）;組Ⅰ與組Ⅲ相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;組Ⅴ介于組Ⅱ與組Ⅳ之間（P＜0.05）。
　　結論:
　　1.外源性重組人促紅細胞生成素在腦損傷后30分鐘內使Akt的磷酸化作用逐漸增強。
　　2.缺氧缺血損傷可以誘導Akt部分激活，參與促進早產兒腦損傷模型損傷腦區(qū)CD34+細胞計數、CD34蛋白、VEGFR2蛋白、VEGF以及Ang-1基因表達增加，但影響較小。
　　3.外源性rh-EPO可以通過激活