miRNAs在肝癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的:通過比較miRNAs在具有不同轉(zhuǎn)移能力的肝癌細胞株MHCC97-H（高轉(zhuǎn)移）和MHCC97-L（低轉(zhuǎn)移）中的表達差異，分析miRNAs與肝癌生物學(xué)特征的相關(guān)性及其在肝癌中表達的臨床意義，從而為進一步提高肝癌的診斷及治療效果提供新的策略及依據(jù)。
　　方法:
　　(1)RNAs芯片技術(shù)對具有不同轉(zhuǎn)移能力的細胞株MHCC97-H（高轉(zhuǎn)移）和MHCC97-L（低轉(zhuǎn)移）中的miRNAs的表達情況進行分析，找出差異表達miRNAs

2、，應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)在人肝癌高低轉(zhuǎn)移細胞株及肝癌和癌旁組織中驗證基因芯片的結(jié)果，初步探討miRNAs在肝癌中的表達及臨床意義。
　　(2)應(yīng)用靶基因預(yù)測網(wǎng)站對差異表達的miRNAs的靶基因進行預(yù)測，根據(jù)預(yù)測結(jié)果選取差異的miRNAs進行進一步的研究。
　　(3)分別上調(diào)和下調(diào)所選取的miRNAs的表達水平，利用體內(nèi)、外實驗檢測改變前后肝癌細胞的生物學(xué)行為，進一步探討miRNAs在肝癌中表達的臨床意義。
　　(4)干

3、擾和過表達miRNAs的靶基因，改變其在肝癌細胞中的表達水平，體內(nèi)、外實驗檢測改變前后肝癌細胞的生物學(xué)行為，明確miRNAs影響肝癌轉(zhuǎn)移的機制。
　　結(jié)果:
　　(1)有13個miRNAs在轉(zhuǎn)移能力不同的肝癌細胞株中的表達存在差異，應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)對肝癌及其相鄰的癌旁組織中miRNAs的進行檢測所得結(jié)果與在細胞株檢測的結(jié)果基本一致。
　　(2)基因預(yù)測網(wǎng)站預(yù)測miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-3

4、4a-5p具有共同的靶基因ST3GAL5，熒光素酶實驗對預(yù)測結(jié)果進行了證實。
　　(3)上調(diào)miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5p的表達水平能夠降低 MHCC97-H細胞的增殖活性，集落形成數(shù)量，侵襲能力及體內(nèi)成瘤性，下調(diào)miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5的表達水平則增強MHCC97-L細胞的增殖活性，集落形成數(shù)量，侵襲能力及體內(nèi)成瘤性。
　　(4)上調(diào)ST3GAL5的表

5、達水平增強MHCC97-L細胞的侵襲能力及體內(nèi)成瘤性，干擾ST3GAL5的表達水平能夠降低MHCC97-H細胞的侵襲能力及體內(nèi)成瘤性。
　　結(jié)論:
　　(1)miRNAs在轉(zhuǎn)移能力不同的肝癌細胞株中存在差異的表達，miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5p與肝癌的侵襲能力呈負相關(guān)。
　　(2)miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5p可能通過負向性調(diào)控糖基因ST3GAL5的表