缺血預(yù)處理通過(guò)激活SOCS-1以及下調(diào)TRAF6的表達(dá)保護(hù)大鼠小腸缺血再灌注損傷.pdf

1、目的:為了探討TLR4(Toll like receptor4)-TRAF6(tumor necrosisfactor receptor associated-factor6)信號(hào)通路在小腸缺血和再灌注損傷中的表達(dá)，以及經(jīng)過(guò)缺血預(yù)處理后大鼠小腸和遠(yuǎn)隔器官組織中TRAF6和SOCS-1(Suppressor of cytokine signaling-1)的表達(dá)變化及意義。我們檢測(cè)了小腸缺血再灌注損傷后，各重要臟器相關(guān)凋亡基因的表達(dá)水平，

2、并觀察其與小腸損傷的關(guān)系。
　　方法:將48只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(250-300g)，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血組、缺血再灌注組和缺血預(yù)處理組(n=8)。假手術(shù)組(Sham)大鼠僅行腸系膜上動(dòng)脈(superior mesenteric artery，SMA)的解剖，然后關(guān)腹2h;缺血組(I)分為缺血1h組(I1h)、缺血3h組(I3h)、缺血6h組(I6h)，采用無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉SMA造成小腸缺血模型;通過(guò)夾閉

3、SMA1h后再灌注1h建立缺血再灌注組(IR);將大鼠缺血10分鐘后再灌注10分鐘，然后夾閉SMA1h后再灌注1h建立缺血預(yù)處理組(IP)。對(duì)腸道損傷進(jìn)行組織病理觀察（H&E染色），并檢測(cè)下腔靜脈血漿中髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)的水平，采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，免疫組化檢測(cè)TRAF6和SOCS-1在小腸組織中的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PC

4、R(Real-time quantitative PCR)檢測(cè)各組TLR4、TRAF6、 RIP1(receptor interacting protein1)、SOCS-1的表達(dá)。Western blot方法檢測(cè)TLR4、TRAF6、RIP1、SOCS-1、cleaved-Caspase-3(cleavedcysteinyl aspartate specific proteinase-3)的表達(dá)。對(duì)TRAF6與RIP1、SOCS-1在

5、mRNA水平上進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:(1)與假手術(shù)組比較，各實(shí)驗(yàn)組中下腔靜脈血漿MPO水平增高(p＜0.05)，缺血再灌注組達(dá)到高峰，缺血預(yù)處理后，MPO水平明顯下降(p＜0.05);(2)H&E染色顯示缺血組與再灌注組中，小腸黏膜損傷嚴(yán)重，缺血預(yù)處理后，小腸黏膜損傷減輕，TUNEL染色法檢測(cè)出缺血組與再灌注組中，細(xì)胞凋亡比例升高(p＜0.05)，缺血預(yù)處理后，細(xì)胞凋亡比例下降;(3)在缺血組和再灌注組，小腸組織中TLR4、

6、TRAF6、RIP1、cleaved-Caspase-3表達(dá)升高，SOCS-1表達(dá)降低，其中，在缺血3h、6h和再灌注組，與假手術(shù)組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。缺血預(yù)處理后，與再灌注組比較，小腸中TLR4、TRAF6、RIP1、cleaved-Caspase-3表達(dá)明顯降低(p＜0.05)，SOCS-1表達(dá)明顯升高(p＜0.05)，且相關(guān)分析顯示TRAF6mRNA的升高與RIP1mRNA的上調(diào)呈正相關(guān)(r=0.84433406)

7、，與SOCS-1mRNA的下調(diào)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.76229915);(4)免疫組化顯示小腸在缺血組和再灌注組TRAF6表達(dá)增強(qiáng)，SOCS-1表達(dá)減弱，在缺血預(yù)處理組，TRAF6表達(dá)減弱，SOCS-1表達(dá)增強(qiáng)，且陽(yáng)性部位主要是小腸黏膜細(xì)胞;(5)在各組中大鼠肺、肝、腎組織的TLR4、TRAF6、RIP1、SOCS-1、cleaved-Caspase-3的表達(dá)與小腸組織具有相似的變化趨勢(shì)。
　　結(jié)論:(1)小腸缺血與再灌注損傷過(guò)程中