雞尾酒免疫組化雙染法提高腫瘤細胞Ki-67指數(shù)準確性的研究.pdf

1、Ki-67是一種與細胞增殖密切相關(guān)的核抗原，其單克隆抗體能標(biāo)記除G0期以外的所有細胞分裂周期中。因此，Ki-67抗體免疫組織化學(xué)染色表達率（Ki-67指數(shù)（Ki-67 LI））可能接近腫瘤的增殖活性。目前，Ki-67抗體在臨床主要用于標(biāo)記腫瘤組織中增殖較快的腫瘤細胞，Ki-67指數(shù)是應(yīng)用最為廣泛的用于評價腫瘤細胞增殖活性的指標(biāo)之一。
　　然而，在病理診斷工作中，要準確在腫瘤組織中標(biāo)記到增殖的腫瘤細胞并不是一件容易的事情，主要原因是

2、：
　?。?）Ki-67抗體可以用于標(biāo)記所有處于增殖期的細胞，不僅限于增殖期的腫瘤細胞,而且可在其他類型的增殖期細胞中表達。
　　（2）在腫瘤組織中，經(jīng)常伴有炎細胞、血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞等多種細胞成分。
　　（3）在腫瘤細胞稀少的組織中，炎細胞有時可以成為其主要成分。此時的Ki-67抗體指數(shù)則表現(xiàn)的是大量炎細胞的增殖情況，而不能準確代表腫瘤組織中腫瘤細胞增殖情況。因此，目前臨床上常用到的Ki-67指數(shù)來表示腫瘤組織

3、的增殖情況，并不十分準確。
　　近年來，免疫組化雙染法的應(yīng)用及成熟為準確檢測腫瘤細胞Ki-67指數(shù)提供了可行的辦法。對于表達特異性標(biāo)記的腫瘤，如神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤可特異性表達Syn抗體，與Ki-67抗體進行雙染，呈現(xiàn)雙陽性的細胞即是增殖期的腫瘤細胞。而在腦膜瘤組織中有大量增殖期的淋巴細胞，淋巴細胞可以表達特異性抗原LCA，應(yīng)用免疫組化雙染法同時標(biāo)記LCA抗體及Ki-67抗體，并使其呈現(xiàn)不同的顏色，那么同時表達兩種顏色的細胞則為增殖期淋

4、巴細胞，應(yīng)從腫瘤細胞Ki-67陽性細胞計數(shù)中除去，由此則可以更加準確的判斷腦膜瘤組織中腫瘤細胞Ki-67指數(shù)，可更加準確的推斷腫瘤增殖情況。目前，國內(nèi)外還缺乏在這方面的相關(guān)研究。本研究主要用到雞尾酒免疫組化雙染法來精確腫瘤細胞Ki-67指數(shù)，從而更加準確的推斷腫瘤組織的增殖情況，為臨床用藥和預(yù)估患者預(yù)后提供更加可靠的依據(jù)。
　　目的：
　　本研究主要探討應(yīng)用雞尾酒免疫組化雙染法，在組織中得到更加準確的腫瘤細胞Ki-67指數(shù)，

5、從而更加準確的判斷腫瘤的增殖活性。
　　方法：
　　1.選取胃腸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織標(biāo)本30例和腦膜瘤組織標(biāo)本29例。
　　2.常規(guī)免疫組化Elivision兩步法：對30例胃腸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織，分別進行 Ki-67抗體單項標(biāo)記和Syn抗體單項標(biāo)記，對29例腦膜瘤組織分別檢測Ki-67抗體和LCA抗體的表達情況。
　　3.雞尾酒免疫組化雙染法:對30例胃腸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織進行Ki-67抗體和Syn抗體雙項標(biāo)記，

6、對30例腦膜瘤組織進行Ki-67抗體和LCA抗體雙項標(biāo)記。并統(tǒng)計Ki-67指數(shù)和腫瘤細胞Ki-67指數(shù)。
　　4.用medcal9.2統(tǒng)計軟件，Bland-Altman分析法檢測常規(guī)免疫組化單染法和雞尾酒免疫組化雙染法在檢測 Ki-67指數(shù)方面這兩種方法的一致性，用Bland-Altman分析法和配對t檢驗檢測常規(guī)免疫組化單染法中Ki-67指數(shù)和雞尾酒免疫組化雙染法中腫瘤細胞Ki-67指數(shù)之間的差異。
　　結(jié)果：
　　

7、胃腸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織和腦膜瘤組織檢測結(jié)果（兩種腫瘤檢測結(jié)果一致）：
　　①對單染Ki-67指數(shù)和雙染時Ki-67指數(shù)進行Bland-Altman分析，結(jié)果顯示兩組數(shù)據(jù)具有較高的一致性，提示免疫組化雙染法不會造成Ki-67總指數(shù)的增多或減少，雙染的方法是可靠的免疫組化方法；
　?、趩稳镜腒i-67指數(shù)和雞尾酒雙染法的腫瘤細胞Ki-67指數(shù)進行Bland-Altman分析，結(jié)果表明單染的Ki-67指數(shù)高于雞尾酒雙染時腫瘤細胞K

8、i-67指數(shù)；
　?、蹎稳镜腒i-67指數(shù)和雞尾酒雙染法的腫瘤細胞Ki-67指數(shù)進行配對t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，p＜0.05。
　　結(jié)論：
　　(1)雞尾酒免疫組化雙染法不會造成Ki-67總指數(shù)的上升或降低，是可靠的免疫組化法。
　?。?）Ki-67/Syn雙抗體雞尾酒雙染法可以提高胃腸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中腫瘤細胞Ki-67指數(shù)的準確性，而Ki-67/LCA雙抗體雞尾酒雙染法同樣也可以提高腦膜瘤組織中腫瘤細胞K