2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:目前乳腺癌是全球范圍內女性健康的重大威脅,且發(fā)病率逐年升高,手術為主的綜合治療是主要治療模式,其中全身化療雖然可改善患者生存,卻伴有嚴重的毒副作用,而生物治療作為一種綠色療法越來越受到關注。干擾素γ(interferon gamma,IFN-γ)作為一種新型免疫調節(jié)因子在惡性腫瘤治療中取得較好的療效,但在乳腺癌中尚無研究?;谏鲜鲅芯勘尘?,本研究篩選出對 IFN-γ和化療藥敏感的乳腺癌細胞株,初步探討IFN-γ聯(lián)合化療藥抑制乳腺癌

2、細胞株增殖的協(xié)同效應,并進一步研究其在基因水平的發(fā)生機制,以期為IFN-γ聯(lián)合化療藥在乳腺癌臨床治療中提供參考。
  方法:首先將乳腺癌細胞株MDA-MB-453、MDA-MB-231、MCF-7、BR3、HCC-1937置于96孔板培養(yǎng),分別以不同濃度IFN-γ(0、60 IU/ml、200 IU/ml、600 IU/ml、2000 IU/ml、6000 IU/ml、20000 IU/ml)、不同濃度ADM(0、0.01μM、0

3、.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM、3μM)、不同濃度CDDP(0、0.1μM、0.3μM、1μM、3μM、10μM、30μM)處理。培養(yǎng)96h后,采用水溶性四唑鹽(WST-8)比色法用酶聯(lián)免疫檢測儀測定450nm處各孔OD值,繪制細胞增殖曲線,比較 IFN-γ、ADM、CDDP對不同乳腺癌細胞株增殖抑制作用的敏感度,選取IFN-γ抗增殖作用最明顯的細胞株及抗增殖作用最明顯的IFN-γ、ADM、CDDP的藥物濃度。然后將IFN-

4、γ分別與ADM、CDDP聯(lián)合作用96小時后,將空白對照組MCF-7乳腺癌細胞株增殖活性設為100%,將IFN-γ濃度梯度作為橫坐標,ADM、CDDP濃度梯度分別作為縱坐標,培養(yǎng)96小時后應用WST-8比色法檢測不同藥物配比濃度下相應孔在450nm處 OD值,繪制細胞增殖曲線,使用 CalcuSyn軟件檢測IFN-γ與ADM、CDDP聯(lián)合作用于乳腺癌細胞時是否具有協(xié)同作用,基于WST結果計算結合指數(shù)(combination index,C

5、I)和單獨成分影響值(fractions affected,F(xiàn)a),CI<1、CI=1、CI>1分別表達兩者之間具有協(xié)同、相加、拮抗作用;選取IFN-γ同ADM、CDDP具有協(xié)同作用的組別,流式細胞儀檢測細胞周期分布情況,實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction, qPCR)技術檢測IFN-γ、ADM、CDDP單獨作用及IFN-γ分別與ADM、CDDP聯(lián)

6、合作用于乳腺癌細胞株后抑癌基因TRAIL表達水平。
  結果:
  1 IFN-γ、ADM、CDDP對不同乳腺癌細胞株的作用:不同濃度的IFN-γ對乳腺癌細胞株 BR3、HCC-1937的抑制增殖作用差異無統(tǒng)計學意義(均為P>0.05);不同濃度的IFN-γ對乳腺癌細胞株MCF-7、MDA-MB-453、MDA-MB-231抑制增殖作用的差異均有統(tǒng)計學意義(均為P<0.05),且對MCF-7、MDA-MB-453、MDA-M

7、B-231三個乳腺癌細胞株在既定濃度范圍內(0-20000IU/ml)隨 IFN-γ濃度增加抑制增殖作用增強,且差異具有統(tǒng)計學意義(均為P<0.05),同一濃度的IFN-γ對MCF-7的增殖抑制作用最為明顯;不同濃度的化療藥ADM和CDDP對MCF-7乳腺癌細胞株均具有抗增殖作用,且均隨藥物濃度增加而抗增殖作用增強,差異具有統(tǒng)計學意義(均為P<0.05)。
  2 IFN-γ聯(lián)合 ADM或 CDDP對乳腺癌 MCF-7細胞株的作用

8、:經(jīng)CalcuSyn軟件分析,IFN-γ聯(lián)合化療藥 ADM聯(lián)合作用于乳腺癌細胞株MCF-7,F(xiàn)a在0.2-0.8之間,CI<1,表明兩者同時作用于MCF-7時具有協(xié)同抗增殖作用;IFN-γ聯(lián)合化療藥CDDP聯(lián)合作用于乳腺癌細胞株MCF-7, Fa在0.2-0.8之間,CI<1,表明兩者同時作用于MCF-7時具有協(xié)同抗增殖作用。
  3流式細胞儀檢測IFN-γ聯(lián)合ADM或CDDP細胞周期分布情況:分別以IFN-γ(6000 IU/m

9、l)、ADM(0.03μM)、CDDP(0.3μM)作用于乳腺癌細胞株MCF-7細胞96h后,經(jīng)流式細胞儀分析,三組細胞中subG1期比例較對照組升高(分別為對照組2.45%,IFN-γ組8.88%、ADM組7.98%、CDDP組7.47%),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。IFN-γ分別聯(lián)合ADM或CDDP,作用于乳腺癌MCF-7細胞株96小時后,聯(lián)合作用組細胞中subG1期比率均較單一用藥組增高(分別為IFN-γ聯(lián)合ADM組33

10、.52%,IFN-γ先于 ADM組26.77%,ADM先于 IFN-γ組30.97%, IFN-γ聯(lián)合CDDP組29.63%,IFN-γ先于 CDDP組31.02%,CDDP先于 IFN-γ組29.71%),差異具有統(tǒng)計學意義(均為P<0.05)。
  4 qPCR技術檢測IFN-γ、ADM、CDDP單獨作用及IFN-γ分別與ADM、CDDP聯(lián)合作用抑癌基因TRAIL表達水平:IFN-γ、ADM、CDDP單一用藥組較空白對照組TR

11、AIL表達水平上調,且差異有統(tǒng)計學意義(均為P<0.05),IFN-γ聯(lián)合ADM、IFN-γ聯(lián)合CDDP組較單一用藥組TRAIL表達水平較均著上調,差異具有統(tǒng)計學意義(均為P<0.05)。
  結論:
  1 IFN-γ對不同乳腺癌細胞株抗增殖作用不同,對MCF-7細胞株的抗增殖作用最為明顯,且一定范圍內具有劑量依賴性。
  2 IFN-γ聯(lián)合ADM或IFN-γ聯(lián)合CDDP均可顯著增強化療藥對MCF-7細胞株的抗增殖作

12、用,且IFN-γ與ADM和IFN-γ與CDDP均有協(xié)同作用。
  3 IFN-γ聯(lián)合ADM或IFN-γ聯(lián)合CDDP均可誘導乳腺癌細胞株MCF-7 subG1期增加,增強抗細胞增殖作用。
  4 IFN-γ、ADM、CDDP均可上調乳腺癌細胞株MCF-7中TRAIL基因表達水平,誘導乳腺癌細胞凋亡;IFN-γ聯(lián)合ADM或IFN-γ聯(lián)合CDDP分別較IFN-γ、ADM、CDDP組TRAIL基因表達水平明顯上調,加速乳腺癌細胞凋亡

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