純鈦表面載LAMA3涂層在種植體-牙齦生物學(xué)封閉形成中的作用.pdf

1、種植義齒要在口腔環(huán)境中獲得長期的穩(wěn)定，不僅需要穩(wěn)固的種植體-骨結(jié)合，種植體-牙齦上皮結(jié)合界面作為生物屏障在抵御病原體入侵中也極為重要。與天然牙-結(jié)合上皮界面相似，種植體周圍上皮主要依靠?jī)?nèi)基板和半橋粒附著在種植體表面。然而，種植體與牙齦的結(jié)合較為薄弱，上皮的附著僅局限在根方1/3。內(nèi)基板中的重要組份為laminin332，其中的α3鏈在細(xì)胞行為的調(diào)控以及半橋粒的形成中起重要作用。本研究通過在種植體表面構(gòu)建載LAMA3基因的生物涂層，利用體

2、內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行生物學(xué)評(píng)價(jià)，并探討該涂層在種植體周圍上皮附著形成中的作用及機(jī)制。
　　本研究中首先利用層層自組裝技術(shù)在純鈦表面制備由殼聚糖(CS)、透明質(zhì)酸(HA)和Ⅳ型膠原(COL)組裝的生物涂層，通過掃描電鏡(SEM)、原子力顯微鏡(AFM)、X射線光電子能譜(XPS)和接觸角測(cè)試儀對(duì)不同組裝層數(shù)以及交聯(lián)前后的涂層進(jìn)行檢測(cè)，并評(píng)估各組樣品對(duì)上皮細(xì)胞活性的影響。綜合表面形貌以及XPS的檢測(cè)結(jié)果，表明CS/(HA/COL)n多層膜

3、組裝至5層時(shí)經(jīng)化學(xué)交聯(lián)后的涂層較為穩(wěn)定，因此選取5層作為后續(xù)研究中的組裝層數(shù)。細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果也表明CS/(HA/COL)n涂層在化學(xué)交聯(lián)前后都具有良好的細(xì)胞相容性。
　　在構(gòu)建完成CS/(HA/COL)5涂層的基礎(chǔ)上，將抗腺病毒抗體偶聯(lián)至涂層表面，利用抗原-抗體的特異性結(jié)合將載LAMA3重組腺病毒固定在CS/(HA/COL)5涂層上，從而實(shí)現(xiàn)純鈦表面LAMA3基因原位轉(zhuǎn)染體系的構(gòu)建。通過條件優(yōu)化，偶聯(lián)抗體的最佳濃度為30μg/孔

4、，每個(gè)樣品腺病毒使用量為1×108 PFU。
　　然后利用人永生化表皮細(xì)胞HaCaT對(duì)純鈦表面載LAMA3基因涂層進(jìn)行細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果表明該涂層有利于上皮細(xì)胞的早期粘附和伸展，能有效提高lamininα3的表達(dá)，并能誘導(dǎo)結(jié)合界面成熟半橋粒結(jié)構(gòu)的形成。
　　最后通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，利用免疫組織形態(tài)學(xué)、透射電鏡觀察和辣根過氧化物酶(HRP)浸潤性檢測(cè)等研究純鈦表面載LAMA3涂層在種植體-牙齦生物學(xué)封閉形成中的作用。結(jié)果表明該涂層在創(chuàng)

5、傷早期可以有效提高種植體周圍上皮lamininα3的表達(dá)，加快種植體周圍上皮的形成，促進(jìn)種植體-牙齦結(jié)合界面半橋粒的整合，相比于光滑表面種植體組可以明顯減少HRP在種植體周圍牙齦組織中的浸潤。
　　本研究在純鈦表面構(gòu)建載LAMA3基因的生物涂層，能有效實(shí)現(xiàn)種植體表面原位基因轉(zhuǎn)染，提高上皮細(xì)胞中l(wèi)amininα3鏈的表達(dá)。體內(nèi)、外的研究均表明該涂層有利于上皮細(xì)胞的早期粘附和伸展，促進(jìn)結(jié)合界面上半橋粒結(jié)構(gòu)的形成，并有效改善種植體-牙齦