疏肝健脾法干預(yù)腹瀉型腸易激綜合征的臨床和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)臨床和實(shí)驗(yàn)研究從腦腸軸結(jié)腸和海馬兩個(gè)層面探索調(diào)控腹瀉型腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感性的途徑，并由此研究疏肝健脾法干預(yù)腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證的效應(yīng)機(jī)制，通過(guò)“方藥（四君子湯合四逆散方）→治法（疏肝健脾法）→病理機(jī)制（肝失疏泄導(dǎo)致脾失健運(yùn)）→生理機(jī)能（肝主疏泄助脾胃運(yùn)化）”的研究思路在一定程度上闡釋肝主疏泄助脾胃運(yùn)化的生物學(xué)基礎(chǔ)，從而豐富腹瀉型腸易激綜合征發(fā)病機(jī)制和中醫(yī)“肝主疏泄助脾胃運(yùn)化”的生物學(xué)內(nèi)涵。
　　方

2、法:
　　一、臨床研究
　　采用隨機(jī)對(duì)照雙盲試驗(yàn)的設(shè)計(jì)進(jìn)行。符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者隨機(jī)分為疏肝組、健脾組、疏肝健脾組和安慰劑組，并分別予以四逆散、四君子湯、四逆散合四君子湯和安慰劑治療28±3天。通過(guò)病例報(bào)告表采集治療前后患者信息，ELISA法檢測(cè)治療前后患者血清腦腸肽，統(tǒng)計(jì)分析證候積分、腹痛評(píng)分、Bristol糞便性狀評(píng)分、腹脹評(píng)分、血清5-羥色胺、P物質(zhì)、神經(jīng)肽Y的變化。
　　二、實(shí)驗(yàn)研究
　　運(yùn)用4％醋酸灌腸復(fù)

3、合慢性心理應(yīng)激法制備腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證大鼠模型，并予疏肝健脾法進(jìn)行干預(yù)。通過(guò)測(cè)量體重、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、Bristol糞便性狀評(píng)分、糞便含水率以及腹壁撤退反射評(píng)分等方法采集干預(yù)前后大鼠行為學(xué)表現(xiàn);實(shí)驗(yàn)結(jié)束后ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清、結(jié)腸和海馬組織5-羥色胺、P物質(zhì)、神經(jīng)肽Y等腦腸肽，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和免疫印跡法檢測(cè)結(jié)腸和海馬組織MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路ERK1、ERK2和c-fos等指標(biāo)，并按統(tǒng)計(jì)學(xué)要求分

4、析相關(guān)指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　一、臨床研究
　　（一）疏肝健脾法對(duì)腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證的干預(yù)作用
　　1.年齡、病程和性別四組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;四組患者病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;四組患者性別構(gòu)成比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.證候積分疏肝健脾組治療前后證候積分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后證候積分比較，差異有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后證候積分差值的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.腹痛評(píng)分疏肝健脾組治療前后腹痛評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后腹痛評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。疏肝健脾組和安慰劑組治療后腹痛評(píng)分差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.Bristol糞便性狀評(píng)分疏肝健脾組治療前后Bristol糞便性狀評(píng)分比較，差異有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后Bristol糞便性狀評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后Bristol糞便性狀評(píng)分差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.腹脹評(píng)分疏肝健脾組治療前后腹脹評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。安慰劑組治療前后腹脹評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后腹脹評(píng)分差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

7、r>　?。ǘ┦韪谓∑⒎▽?duì)腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證患者血清腦腸肽的干預(yù)作用
　　1.5-羥色胺疏肝健脾組治療前后血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。安慰劑組治療前后血清5-HT比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后血清5-HT差值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.P物質(zhì)疏肝健脾組治療前后血清SP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后血清SP比較

8、，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后血清SP差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.神經(jīng)肽Y疏肝健脾組治療前后血清NPY比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后血清NPY比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后血清NPY差值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　?。ㄈ┧慕M有效率比較
　　疏肝健脾組有效率為90％，疏肝組有效率為83

9、.33％，健脾組有效率為76.67％，安慰劑組有效率為70％。治療后四組有療效比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　二、實(shí)驗(yàn)研究
　　（一）疏肝健脾法對(duì)腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證大鼠行為學(xué)的影響
　　1.一般情況造模后正常對(duì)照組大鼠活躍，鼠毛整潔有光澤，未觀察到大鼠舔舐腹部和弓背抬腹現(xiàn)象，無(wú)肛周污跡，無(wú)稀溏或粘液樣大便，墊料干燥無(wú)明顯臭味，鼠籠清潔。模型組大鼠活躍度低、鼠毛缺乏光澤并可見(jiàn)少許糞便附著，可見(jiàn)大鼠

10、舔舐腹部和弓背抬腹現(xiàn)象，肛周污跡顯著，糞便稀溏或伴有黏液，墊料臭味明顯，鼠籠清潔度差。疏肝健脾組大鼠表現(xiàn)活躍，鼠毛整潔有光澤，未觀察到大鼠舔舐腹部和弓背抬腹現(xiàn)象，未觀察到肛周污跡和稀溏樣大便，墊料干燥無(wú)明顯臭味，鼠籠清潔。
　　2.體重空白組和模型組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和疏肝組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)

11、學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和疏肝健脾組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.糖水偏好實(shí)驗(yàn)空白組和模型組治療后大鼠糖水偏愛(ài)百分比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療后大鼠糖水偏愛(ài)百分比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝組治療后大鼠糖水偏愛(ài)百分比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠糖水偏愛(ài)百分比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0

12、5)。
　　4.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)空白組和模型組治療后大鼠曠場(chǎng)總路程比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療后大鼠曠場(chǎng)總路程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝組治療后大鼠曠場(chǎng)總路程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠曠場(chǎng)總路程比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　?。ǘ┦韪谓∑⒎▽?duì)腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證大鼠外周敏化的作用
　　1.血清腦腸肽

13、　　(1)大鼠血清5-HT空白組和模型組治療后大鼠血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和健脾組治療后大鼠血清5-HT比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。模型組和疏肝組治療后大鼠血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(2)大鼠血清SP空白組和模型組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型

14、組和健脾組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和疏肝組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(3)大鼠血清NPY空白組和模型組治療后大鼠血清NPY比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療后大鼠血清NPY比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。模型組和疏肝組治療后大鼠血清NPY比較，差異

15、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠血清NPY比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　?。ㄒ唬?％醋酸灌腸復(fù)合慢性心理應(yīng)激法造?？蓪?dǎo)致5-HT、SP和NPY等在腦腸軸異常表達(dá)，并激活結(jié)腸和海馬組織MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使c-fos轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)異常升高，進(jìn)而產(chǎn)生腹瀉型腸易激綜合征的內(nèi)臟高敏感性。
　?。ǘ┦韪谓∑⒎ㄖ委煾篂a型腸易激綜合征的效應(yīng)機(jī)制與調(diào)節(jié)異常水平5-HT、S

16、P和NPY等腦腸肽介導(dǎo)的MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化，下調(diào)c-fos表達(dá)，從而改善外周敏化和中樞敏化有關(guān)。
　?。ㄈ└篂a型腸易激綜合征肝郁脾虛這一核心病機(jī)在分子層面的體現(xiàn)是:異常水平腦腸肽引起結(jié)腸和海馬的MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的過(guò)度激活。
　?。ㄋ模案沃魇栊怪⑽高\(yùn)化”的生物學(xué)內(nèi)涵與腦腸肽及其受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)腦腸軸中樞和外周的調(diào)控相關(guān)。
　　創(chuàng)新點(diǎn):
　?。ㄒ唬┴S富了腹瀉型腸易激綜合征的發(fā)病

17、機(jī)制，認(rèn)為MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常變化是引起腹瀉型腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感性的重要途徑，并由此入手，發(fā)現(xiàn)疏肝健脾法治療腹瀉型腸易激綜合征的效應(yīng)機(jī)制是調(diào)控異常水平腦腸肽引起的MAPK-ERK信號(hào)通路變化，降低c-fos的表達(dá)，從而改善內(nèi)臟高敏感性。
　　（二）認(rèn)為腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛這一核心病機(jī)的在分子層面的體現(xiàn)與激活腦腸軸外周和中樞的MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)，并由病理反推生理，闡釋了“肝主疏泄助脾胃運(yùn)化”的生