化肝通絡(luò)方對原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:建立原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型，驗(yàn)證化肝通絡(luò)方預(yù)防性給藥的療效，探索化肝通絡(luò)方對原發(fā)性膽汁性肝硬化的作用機(jī)制。
　　方法:(1)PBC模型的建立:雌性C57BL/6小鼠腹腔注射poly I∶C，于第16、20、24周檢測肝臟生化指標(biāo)、AMA-M2，并行肝臟H&E病理染色及免疫組化檢測CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞。(2)化肝通絡(luò)方預(yù)防性給藥藥效及機(jī)制研究:雌性C57BL/6小鼠給予poly I∶C腹腔注射復(fù)制PBC模型，并從造

2、模起予以化肝通絡(luò)方灌胃，行預(yù)防性治療。第20周時(shí)，通過肝臟生化指標(biāo)、AMA-M2及肝臟HE染色驗(yàn)證預(yù)防給藥組的療效，另外通過免疫組化及PCR檢測肝組織TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3的表達(dá)，探索本方作用機(jī)制。(3)化肝通絡(luò)方治療性給藥機(jī)制研究:PBC模型成立后，分別給予化肝通絡(luò)方、陽性藥（熊去氧膽酸）及二者聯(lián)合治療，灌胃8周后處死小鼠，通過免疫組化及PCR檢測肝組織TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3的表達(dá)，

3、探索本方治療PBC的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:(1)原發(fā)性膽汁性肝硬化模型的建立:第24周時(shí)，模型組與空白組相比，ALT、AST、ALP、TBIL、AMA-M2表達(dá)均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組肝組織學(xué)表現(xiàn)為匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤，部分肝細(xì)胞明顯腫脹，部分膽管上皮細(xì)胞基底膜不完整，免疫組化可見散在深染的CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤;空白組肝組織學(xué)大致正常。(2)化肝通絡(luò)方預(yù)防性給藥藥效及機(jī)制研究:預(yù)防給藥組小鼠肝臟

4、生化指標(biāo)、AMA-M2、肝臟病理較模型組明顯改善，其中ALP、GGT、TBIL、AMA-M2差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。免疫組化及PCR檢測TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2、Smad3的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)預(yù)防給藥組較模型組均有一定程度的改善，其中高劑量組尤為明顯，其TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2與模型組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)化肝通絡(luò)方治療性給藥機(jī)制研究:免疫組化及PCR檢測顯示，治療