瑤藥風(fēng)濕骨痛噴霧劑抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥效學(xué)毒理學(xué)研究.pdf

1、目的：研究瑤藥風(fēng)濕骨痛噴霧劑（ROS）對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠的抗風(fēng)濕效應(yīng)及其作用機(jī)制；并通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)、皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn)、長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)其藥物安全性，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：1、采用生斷腸草，兩面針,七葉一枝花，九節(jié)風(fēng)等藥材，用80％乙醇超聲提取，濃縮至6.3g/mL待用。
　　2、采用大鼠背部去毛給藥方法,進(jìn)行完整和破損皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)。觀察動(dòng)物的體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的

2、變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)的變化。對(duì)死亡動(dòng)物大體解剖，其他動(dòng)物在觀察期結(jié)束后大體進(jìn)行解剖。用肉眼觀察主要臟器的顏色、體積、相對(duì)位置；當(dāng)有肉眼可見病變時(shí)，則對(duì)病變器官進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。
　　3、采用豚鼠兩側(cè)背部去毛給藥的方法，進(jìn)行皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)，觀察局部用藥的過(guò)敏反應(yīng)，計(jì)算反應(yīng)的平均值和致敏發(fā)生率。
　　4、采用大鼠背脊兩側(cè)脫毛，手術(shù)刀片劃傷至滲血，建立破損皮膚模型；實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠外觀體征、行為活動(dòng)、皮毛、糞

3、便、食量和體重的變化;測(cè)定血清中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）；谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）；堿性磷酸酶（AKP）；尿素酶（BUN）；總蛋白(TP)；白蛋白(ALB)；總膽紅素（T-BIL）；肌酸激酶（CK）；鈉（Na）；氯（CL）；總膽固醇（TCHO）的含量,并觀察各組大鼠肝臟、腎臟、脾臟HE染色病理形態(tài)學(xué)變化。
　　5、采用完全弗式佐劑建立類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型（AA）。每3天測(cè)量一次致炎足(原發(fā)性)和對(duì)側(cè)足(繼發(fā)性)的體積，計(jì)算足趾腫脹度和腫脹

4、抑制率。檢測(cè)血清及炎性組織液中白介素-1（IL-1），白介素-6（IL-6），腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，前列腺素E2(PGE2)，類風(fēng)濕因子（RF）的含量，并觀察各組大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色病理形態(tài)學(xué)變化。
　　6、采用牛二型膠原建立類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型（CIA）。每3天測(cè)量一次致炎足(原發(fā)性)和對(duì)側(cè)足(繼發(fā)性)的體積，計(jì)算足趾腫脹度。檢測(cè)血清及炎性組織液中白介素-1（IL-1），白介素-6（IL-6），腫瘤壞死因子-α(TNF-α

5、)，前列腺素E2（PGE2），類風(fēng)濕因子（RF）的含量，并觀察各組大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色病理形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：1、急性毒性實(shí)驗(yàn)：ROS-H，ROS-L無(wú)一例死亡，外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、大小便、呼吸狀況正常，臟器的體積、顏色、相對(duì)位置無(wú)異常變化，各組體重?zé)o顯著性差異（p>0.05）。
　　2、皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn):ROS組與空白對(duì)照組相比，動(dòng)物的一般狀態(tài)、行為活動(dòng)、外觀體征均無(wú)異常，既無(wú)紅斑也無(wú)水腫，差異無(wú)顯著性意義。ROS對(duì)

6、豚鼠無(wú)致敏作用。
　　3、長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)：連續(xù)給藥3個(gè)月，停藥2 w，無(wú)大鼠死亡，ROS-H、ROS-M、ROS-L給藥組體重、血液學(xué)、血液生化學(xué)、臟器系數(shù)與空白對(duì)照組比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。系統(tǒng)尸解，主要臟器的顏色位置未見異常，肝臟、脾臟、腎臟HE染色沒有明顯病理學(xué)改變。
　　4、佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠（AA）藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)：①ROS給藥組可明顯減輕AA大鼠的足趾腫脹度；②ROS給藥組可以降低關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）（p<

7、0.05）；③ROS各給藥組均能降低血清和炎性組織液中PGE2，IL-1，IL-6，TNF-a，RF水平(P＜0.05 or P＜0.01)；④病理組織學(xué)檢查，ROS給藥組能夠抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠的滑膜增厚和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。ROS對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠具有較好的治療效果。
　　5、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型藥效學(xué)實(shí)驗(yàn):①ROS給藥組可明顯減輕AA大鼠的足趾腫脹度；②ROS給藥組可以降低關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）（p<0.05）；③ROS各給藥組

8、均能降低降低血清和炎性組織液PGE2，IL-1，IL-6,TNF-a，RF水平(P＜0.05 or P＜0.01)；④病理組織學(xué)檢查，ROS給藥組能夠抑制大鼠關(guān)節(jié)的滑膜增厚和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。所以，ROS對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)炎具有較好的治療效果。
　　結(jié)論：1、皮膚過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)表明，ROS對(duì)皮膚不具有致敏反應(yīng)；2、急性毒性、長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)表明，ROS經(jīng)皮膚短期、長(zhǎng)期給藥都是安全無(wú)毒害的。3、佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，以及膠原誘導(dǎo)性關(guān)