苦瓜汁抗腸炎的功能評價(jià)及初步機(jī)理研究.pdf

1、苦瓜不僅是我國一種主要的蔬菜品種，同時(shí)也是一種最常用的兼具藥效的食物，但迄今為止苦瓜是否具有抗炎作用以及其抗炎的分子機(jī)理尚未清楚。本研究通過建立小鼠及巨噬細(xì)胞炎癥模型，從蛋白、RNA水平分析苦瓜汁抗炎作用及分子機(jī)制。采用葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium，DSS)誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎來模擬人類潰瘍性結(jié)腸炎并對其進(jìn)行病理及宏觀指標(biāo)分析;同時(shí)以脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264

2、.7產(chǎn)生炎癥研究苦瓜汁對機(jī)體炎癥的防治作用。
　　通過對對照組、DSS損傷組、苦瓜汁保護(hù)組的小鼠結(jié)腸進(jìn)行病理學(xué)分析，結(jié)果表明:DSS可破壞小鼠的結(jié)腸上皮粘膜和腺體隱窩結(jié)構(gòu)，而苦瓜汁保護(hù)組小鼠的結(jié)腸損傷情況相對于DSS損傷組有明顯減輕，上皮黏膜結(jié)構(gòu)和隱窩結(jié)構(gòu)較為完整，出現(xiàn)浸潤情況的炎癥細(xì)胞數(shù)量大為減少。對三組小鼠的疾病活化指數(shù)（disease activity index，DAI）及體重進(jìn)行評價(jià)，DAI評分分別為:0.68±0.25

3、、5.71±5.19和4.98±4.62;體重分別為:43.45±0.19g、40.87±2.48 g和41.78±1.18 g。發(fā)現(xiàn)損傷組小鼠DAI評分及體重明顯高于對照組及苦瓜汁保護(hù)組(P＜0.01)。
　　通過研究三組小鼠與炎癥最為相關(guān)的宏觀指標(biāo)（包括結(jié)腸重量、結(jié)腸長度和脾臟重量等），結(jié)果發(fā)現(xiàn):對照組小鼠、DSS損傷組小鼠以及苦瓜汁保護(hù)組小鼠結(jié)腸重量、長度及脾臟重量分別為:502±97.06 mg、590±51.96 mg、

4、522±96.80 mg;10.66±0.59 cm、8.02±0.48 cm、9.52±1.03 cm;152±47.64 mg、210±50.99 mg、178±54.50 mg。DSS損傷組及苦瓜汁保護(hù)組小鼠結(jié)腸長度均有明顯縮短且重量顯著增加，同時(shí)小鼠體內(nèi)免疫系統(tǒng)的紊亂導(dǎo)致DSS損傷組、苦瓜汁保護(hù)組小鼠脾臟出現(xiàn)增大現(xiàn)象。
　　白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)是最早釋放的主要前炎性細(xì)胞因子之一，它通

5、過上調(diào)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞使得相關(guān)炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（tumor crosis factor-α，TNF-α）、干擾素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)等表達(dá)，它還可以誘導(dǎo)急性期蛋白、氧自由基等生成，這些分子分別通過作用于神經(jīng)元或者膠質(zhì)細(xì)胞而促進(jìn)其他炎癥性分子的產(chǎn)生，進(jìn)而引發(fā)炎癥。IL-1β為促炎因子，促進(jìn)趨化中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞進(jìn)入腸道病變部位，引起一系列組織破壞和腸道炎癥反應(yīng)。IFN-γ由機(jī)體內(nèi)淋巴細(xì)胞所分泌，

6、參與分泌主要組織相容性抗原(MajorHistocompatibility Complex，MHC)的表達(dá)和相關(guān)免疫調(diào)節(jié)。在許多炎癥性腸道疾病中，IFN-γ的表達(dá)量顯著增加。TNF-α是在炎癥刺激下由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等特定細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，它具有多種生物學(xué)活性，如:促使中性粒細(xì)胞大量聚集，使機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，同時(shí)TNF-α還可以促進(jìn)IFN-γ和IL-8的產(chǎn)生，進(jìn)一步加劇炎癥。研究證明TNF-α大量產(chǎn)生是炎癥性腸病(inflamm

7、atorybowel diseases，IBD)發(fā)病機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)，在IBD患者的外周血、糞便以及腸粘膜中均可檢測出高水平的TNF-α。
　　本實(shí)驗(yàn)中，DSS導(dǎo)致誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型中IL-1β、IFN-γ的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著升高，LPS誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥模型中IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著升高。添加苦瓜汁后，保護(hù)組的IL-1β、IFN-γ和TNF-α表達(dá)較損傷組有所下降，表明苦瓜汁可以干預(yù)IL-1β、IFN-