Gli抑制劑GANT61對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21凋亡及侵襲能力的影響.pdf

1、目的：食管癌是我國常見的消化道腫瘤之一，我國食管癌患者的發(fā)病率和死亡率均居世界首位，其病理類型以食管鱗狀細(xì)胞癌為主。目前食管癌的手術(shù)、放化療治療效果欠佳，患者生存預(yù)后不理想，其分子靶向領(lǐng)域的治療越來越得到人們的重視。Hedgehog（Hh）信號(hào)通路在多細(xì)胞生物胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。Hh信號(hào)通路的活化參與成體生物組織的干細(xì)胞調(diào)控、組織損傷修復(fù)和血管再生等多種生理機(jī)能。Gli基因作為Hh信號(hào)通路的最終執(zhí)行者，其異常持續(xù)的激活可以啟動(dòng)

2、下游多種與腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，Gli基因在多種人類惡性腫瘤中異常激活并參與到腫瘤的發(fā)生發(fā)展及惡性生物學(xué)特性之中。研究發(fā)現(xiàn)Gli1蛋白在食管鱗癌組織中異常增高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生形成密切相關(guān)，并且可作為評(píng)價(jià)患者生存預(yù)后的獨(dú)立因素。針對(duì)Hh信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子Gli的特異性抑制劑GANT61能夠誘導(dǎo)惡性間皮瘤、急性髓系白血病、橫紋肌肉瘤、胰腺癌等腫瘤細(xì)胞的凋亡，目前國內(nèi)外關(guān)于GANT61對(duì)人類食管鱗癌作用的研究較為少見，本研究主

3、要探討 Gli抑制劑 GANT61對(duì)人類食管鱗癌細(xì)胞OE21凋亡和侵襲能力的影響，探究食管鱗癌細(xì)胞的凋亡機(jī)制，尋找低毒高效的食管鱗癌分子靶向藥物。
　　方法：采用MTS法檢測(cè)不同濃度（0、1.171、1.756、2.634、3.951、5.936、8.889、13.333、20、30μmol/L）GANT61處理72h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21的活力抑制作用，繪制細(xì)胞活力曲線。計(jì)算IC50。采用Western blot方法檢測(cè)10μm

4、ol/L GANT61處理24h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21中Gli1， Fas及cleaved caspase-3蛋白表達(dá)的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)10μmol/L GANT61處理24h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21細(xì)胞凋亡的影響。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)10μmol/L GANT61處理24h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1 MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GANT61處理72h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞OE21存在明顯細(xì)胞

5、毒性作用，顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長活力，隨藥物濃度的增加，細(xì)胞活力呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。IC50=7.975μmol/L。
　　2 Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，GANT61處理24h能夠明顯降低食管鱗癌細(xì)胞OE21中Gli1蛋白的表達(dá)，F(xiàn)as及cleaved caspase-3凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)量明顯升高。
　　3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，GANT61處理食管鱗癌細(xì)胞OE2124h后可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率明顯增加，與對(duì)

6、照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　4 Tanswell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GANT61處理食管鱗癌細(xì)胞OE2124h后，細(xì)胞侵襲數(shù)目明顯減少，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：Gli1抑制劑GANT61對(duì)人類食管鱗癌細(xì)胞OE21具有明顯的細(xì)胞毒性作用，可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長活力，且呈明顯劑量依賴性，經(jīng)計(jì)算IC50=7.975μmol/L。Western blot結(jié)果表明GANT61能夠顯