沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞過早衰老進(jìn)程中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　探討在非接觸共培養(yǎng)條件下，由衰老髓核細(xì)胞(NPCs)微環(huán)境誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的過早衰老過程中沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（SIRT1）的表達(dá)變化及意義。
　　方法:
　　分離培養(yǎng)鑒定大鼠骨髓MSCs及NPCs，在Transwell小室中建立非接觸共培養(yǎng)體系，實(shí)驗(yàn)分A組單獨(dú)培養(yǎng)MSCs、B組MSCs與正常NPCs及C組MSCs與衰老NPCs，C組NPCs行衰老誘導(dǎo);同時(shí)對每組設(shè)置3d、6d、9d

2、時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。比色法、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RQ-RT-PCR)、Western blot法對各組培養(yǎng)MSCs不同時(shí)間點(diǎn)的SIRT1酶活性、mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白含量變化進(jìn)行檢測。培養(yǎng)9d檢測p53蛋白含量、衰老相關(guān)β半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性及過氧化物歧化酶1(SOD1)含量評價(jià)細(xì)胞衰老及氧化應(yīng)激水平。
　　結(jié)果:
　　成功分離并培養(yǎng)大鼠MSCs和NPCs; MSCs鑒定CD29、CD34、CD45、CD90

3、表達(dá)率分別為95.0％、0.282％、2.29％、97.8％; NPCs陽性表達(dá)Ⅱ型膠原和蛋白聚糖。共培養(yǎng)后酶活性檢測顯示C組3d的SIRT1酶活性顯著高于A、B組(P＜0.05)，隨后減低，至第9d低于A、B兩組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。RQ-RT-PCR結(jié)果顯示C組3d、6d的SIRT1 mRNA表達(dá)上調(diào)（1.39±0.08，1.82±0.10）較A組（1.00±0.01，1.000.02）與B組(0.96±0.05，

4、1.03±0.07)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);C組9d表達(dá)下調(diào)(0.74±0.11)顯著低于A、B組（1.00±0.01，1.07±0.10）(P＜0.05)。Western blot結(jié)果示，較A、B組SIRT1蛋白表達(dá)水平，C組SIRT1蛋白表達(dá)隨時(shí)間延長而逐漸降低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。共培養(yǎng)第9d，C組p53及SOD1蛋白表達(dá)顯著高于A、B組(P＜0.05);A、B、C組SA-β-gal陽性細(xì)胞率分別為（5