若干寡糖的功能特性及對(duì)腸道生理生態(tài)調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、功能性寡糖是一類不被機(jī)體消化酶降解的低聚糖，進(jìn)入腸道后，能夠被共生的微生物選擇性地作為碳源，進(jìn)而可促進(jìn)腸道有益菌增殖，與此同時(shí)，還具有抑制腸內(nèi)病原菌的黏附、增加腸粘膜免疫應(yīng)答的作用。目前，已有寡糖類產(chǎn)品如果寡糖、甘露寡糖、殼寡糖等作為腸道保護(hù)劑應(yīng)用到人及動(dòng)物上。然而由于人們對(duì)寡糖作用機(jī)理缺乏深入的系統(tǒng)的研究，寡糖類產(chǎn)品的功能常常被誤導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)寡糖影響機(jī)體腸道生態(tài)和生理這一特性，探討寡糖對(duì)乳酸桿菌生長(zhǎng)特性的影響，并以腸道上皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)

2、模型，從細(xì)胞水平，研究寡糖對(duì)腸道病原菌及有益菌黏附抑制的作用，此外還采用小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探討寡糖的?duì)腸道生理代謝，免疫調(diào)節(jié)、腸道微生態(tài)及急性腸炎的保護(hù)作用。
　　 主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面：(1)寡糖的理化性質(zhì)初步分析；隨后選取兩株乳酸桿菌，嗜酸乳桿菌和德氏乳桿菌，并分別對(duì)其生長(zhǎng)、凝集及抗菌特性進(jìn)行測(cè)定；研究四種寡糖作為碳源對(duì)乳桿菌生長(zhǎng)、代謝的影響，以及冷藏、高溫、冷凍干燥、人工腸胃液等應(yīng)激環(huán)境下的保護(hù)作用。(2)采用HT-29細(xì)

3、胞模型，評(píng)價(jià)嗜酸乳桿菌、大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的黏附能力，研究寡糖及乳酸菌對(duì)兩株腸道病原菌黏附的抑制作用，及其影響因素。(3)選用Balb/c小鼠，通過灌胃的方法研究寡糖對(duì)小鼠腸粘膜組織形態(tài)、微生態(tài)、礦物質(zhì)吸收、短鏈脂肪酸、消化酶、粘膜免疫應(yīng)答的影響。(4)使用葡聚糖硫酸鈉(DSS)對(duì)Balb/c小鼠進(jìn)行急性腸炎的造模，選用FOS和GOS寡糖以及嗜酸乳桿菌探討對(duì)小鼠腸道的保護(hù)作用，研究小鼠生長(zhǎng)、腸道組織損傷、疾病活動(dòng)指數(shù)(ADI)、腸

4、道免疫細(xì)胞的變化。
　　 主要結(jié)果如下：
　　 (1)所選的四種寡糖分子量在450-800范圍內(nèi)，紅外光譜圖呈現(xiàn)典型的低聚糖特性，具較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性、吸濕和保濕能力；兩株乳酸桿菌，嗜酸乳桿菌和德氏乳桿菌對(duì)大腸桿菌、嗜水氣單胞菌和副溶血性弧菌的生長(zhǎng)具有抑制作用，在菌體各組分(培養(yǎng)上清液，SCS；胞外粗多糖，EPS;細(xì)胞質(zhì)，CP;細(xì)胞壁，CW)中，SCS抑制效果最為明顯；四種寡糖，F(xiàn)OS、GOS、COS和MOS均能被兩株乳酸桿

5、菌作為碳源很好地利用，在抗應(yīng)激的實(shí)驗(yàn)中，寡糖的添加對(duì)菌體的存活率有所影響；在人工胃液和人工腸液中與空白對(duì)照組相比，添加FOS和GOS能夠明顯提高乳酸菌的存活率（P＜0.05），且效果優(yōu)于葡萄糖組，在高溫、冷凍干燥、及冷藏處理下，與對(duì)照組相比，各寡糖均能提高菌體存活率（P＜0.05）。
　　 (2)嗜酸乳桿菌、大腸桿菌及金黃色葡萄球菌在HT-29細(xì)胞上的黏附率分別為14％,25％和22％，侵襲率分別為0,5％和2％，細(xì)胞損傷率分別

6、為0.71％,6.8％和4.14％；嗜酸乳桿菌的SCS能夠顯著的抑制大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的黏附；四種寡糖對(duì)兩株病原菌的黏附有一定的抑制能力，其中與對(duì)照組相比GOS對(duì)大腸桿菌的黏附抑制最為顯著(P＜0.01),MOS對(duì)金黃色葡萄球菌的黏附抑制最為顯著(P＜0.01)，同時(shí)存在劑量效應(yīng)，GOS和MOS分別在20mg ml-1和15mg ml-1達(dá)到最高。
　　 (3)灌胃1000mg/kg·d糖后，其中FOS、MOS和COS可以

7、提高小鼠的胸腺指數(shù)，四種寡糖對(duì)小鼠腸道鈣鎂鐵的吸收均有不同程度的提高，且提高盲腸內(nèi)的SCFA含量，增加盲腸和結(jié)腸內(nèi)容物，提高盲腸的腸壁重量，盲腸內(nèi)腸桿菌和腸球菌減少，雙歧桿菌和乳桿菌增加；此外灌胃含嗜酸乳桿菌(108CFU ml-1)各寡糖組，對(duì)盲腸SCFA、腸道菌群，脾臟指數(shù)影響更為明顯。
　　 (4)7％DSS飲用水造模過程中，與生理鹽水組相比，F(xiàn)OS、GOS、嗜酸乳桿菌及其混合組均能降低小鼠ADI(P＜0.05)，其中與治

8、療組(SASP)相比，嗜酸乳桿菌及其混合組的ADI要低(P＜0.05）；與生理鹽水水對(duì)照組相比，處理組還能降低結(jié)腸組織髓過氧化物酶(MPO)活性(P＜0.05）；寡糖及乳酸菌處理組的結(jié)腸組織切片觀察，其損傷程度比生理鹽水組輕
　　 綜上所述，F(xiàn)OS、COS、MOS和GOS四種寡糖能夠作為所選乳酸菌的增殖底物，且提高乳酸菌的抗應(yīng)激能力，增強(qiáng)菌體的存活力。同時(shí)，四種寡糖不同程度的抑制腸道病原菌大腸桿菌和金黃色葡萄球菌在腸細(xì)胞上的黏附