口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血miRNA的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:檢測(cè)分析口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中miRNA表達(dá)譜，篩選出口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌差異性血清miRNA，對(duì)篩選出的miRNA進(jìn)行選擇性驗(yàn)證，尋找特異性表達(dá)的血清miRNA，為口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷、早期治療以及預(yù)后判定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1、按照外周血采集規(guī)范收集3例口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者的血液標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組患者未進(jìn)行任何特殊治療，均有組織病理學(xué)診斷依據(jù)，排除其它系統(tǒng)腫瘤或和口

2、腔轉(zhuǎn)移性腫瘤。對(duì)照組采用3例正常人群的外周血。于清晨空腹抽取外周靜脈血2mL，抗凝處理，-80℃保存。血液標(biāo)本在室溫下放置時(shí)間不超過1h。
　　2、使用RNA提取試劑盒對(duì)標(biāo)本進(jìn)行總RNA的提純。
　　3、進(jìn)行RNA濃度和純度的檢測(cè)。
　　4、稀釋樣本使各其RNA濃度相等，按照試劑盒的說明書進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄。
　　5、96孔板選擇human serum plasma mima pcr array試劑盒，進(jìn)行qRT-

3、PCR反應(yīng)進(jìn)行差異性miRNA的篩選。
　　6、選取外周血hsa-miR-222-3p、hsa-miR-423-5p進(jìn)行驗(yàn)證，擴(kuò)大標(biāo)本量至每組30例;提取總RNA，進(jìn)行RNA濃度和純度的檢測(cè)。
　　7、稀釋樣本使各樣本的RNA濃度相等，進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。
　　8、結(jié)果判定及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　miRNA的表達(dá)水平差異用2-ΔΔCT來表示，整理每個(gè)基因的CT值，再用每組自身的目的基因CT值減去自身內(nèi)參基因CT值，

4、即為ΔCT，公式為ΔCT=CT（目的基因）-CT（內(nèi)參基因），求其均值;其中C.39作為內(nèi)參。再用本次實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組的ΔCT減去對(duì)照組的ΔCT，公式為ΔΔCT=ΔCT（實(shí)驗(yàn)組）-ΔCT(對(duì)照組)。Fold Change值為2-ΔΔCT，求其均值。Fold Change大于2表明實(shí)驗(yàn)組中miRNA表達(dá)水平較對(duì)照組的上調(diào)且有意義。FoldChange小于0.5表明實(shí)驗(yàn)組中miRNA表達(dá)水平較對(duì)照組的下調(diào)且有意義。以上所有統(tǒng)計(jì)學(xué)方法均在Exce

5、l軟件上進(jìn)行。
　　利用相對(duì)定量的方法來檢測(cè)hsa-miR-222-3p、hsa-miR-423-5p在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌患者外周血中表達(dá)水平的差異。miRNA的表達(dá)水平差異用RQ=2-ΔΔCT來表示。兩種miRNA在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌與正常組外周血中的表達(dá)水平的以均值±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±SD)表示，采用完全隨機(jī)的兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)比較各組件差異，P＜0.05為顯著性差異。以上所有統(tǒng)計(jì)學(xué)方法均在SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件上進(jìn)行。<

6、br>　　結(jié)果:
　　1、口腔頜面部鱗癌患者外周血miRNA高于正常人外周血miRNA且有意義的miRNA有8個(gè)(Fold Change＞2)。
　　2、口腔頜面部鱗癌患者外周血miRNA低于正常人外周血miRNA且有意義的miRNA有18個(gè)(Fold Change＜0.5)。
　　3、30例實(shí)驗(yàn)組的hsa-miR-222-3p表達(dá)水平平均值為5.587±0.218，30例對(duì)照組的表達(dá)水平平均值為0.972±0.177

7、?？谇活M面部鱗狀細(xì)胞癌組的hsa-miR-222-3p表達(dá)水平較正常組中的表達(dá)水平間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4、30例實(shí)驗(yàn)組的hsa-miR-423-5p表達(dá)水平平均值為0.431±0.066，30例對(duì)照組的表達(dá)水平平均值為1.206±0.195。口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌組的hsa-miR-423-5p表達(dá)水平較正常組中的表達(dá)水平間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、在口腔頜面部鱗狀細(xì)胞