氧化應(yīng)激作用對抗原抗體結(jié)合活性影響的定量評估和比較觀察.pdf

1、目的:本文通過定量評估氧化劑對抗原抗體結(jié)合活性的影響，探討氧化應(yīng)激對免疫系統(tǒng)的毒害作用，同時比較觀察氧化應(yīng)激與DNA損傷、氧化應(yīng)激與凝血功能變化等，進(jìn)一步全面評價氧化應(yīng)激的生物學(xué)效應(yīng)，深入了解氧化應(yīng)激對機(jī)體的影響。
　　方法:1.采用沉淀反應(yīng)中的雙向擴(kuò)散試驗，通過觀察瓊脂凝膠板中形成沉淀線的清晰程度，來表示高錳酸鉀，碘和過氧化氫三種氧化劑在該反應(yīng)中對抗原抗體結(jié)合活性的影響。沉淀反應(yīng)測定多克隆抗體，而不能測定單克隆抗體。
　　

2、2.采用健康人的B型紅細(xì)胞和O型血清，通過B型紅細(xì)胞表面的B抗原與O型血清中的抗B抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，用各氧化劑濃度對應(yīng)下的凝集度求面積作為衡量該濃度的氧化劑對凝集反應(yīng)抗體活性的反應(yīng)強(qiáng)度的單位。凝集實驗主要測定IgM抗體。
　　3.采用酶免疫技術(shù)中的酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測乙型肝炎表面抗體，通過酶標(biāo)儀測定OD值的大小來表示ELISA試驗中三種氧化劑對IgG抗體活性的影響。
　　4.采用氧化還原電位直接測定法評價血清的抗氧化能力，將

3、對抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用的ID50濃度的氧化劑加到血清中，測定此濃度下的氧化劑對血清總抗氧化力的影響。
　　5.本文選定聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，將其DNA模板氧化處理，通過觀察瓊脂電泳擴(kuò)增條帶的清晰程度，進(jìn)而分析氧化劑對DNA的損傷作用。
　　6.本文采用一次性負(fù)壓定量血凝管、全自動血凝分析儀及其配套凝血試劑，通過檢測經(jīng)過氧化劑處理后的血液標(biāo)本的凝血四項指標(biāo)，探討氧化劑對凝血功能的影響。
　　結(jié)果:1.本文中雙向擴(kuò)

4、散試驗簡單易行，并發(fā)現(xiàn)高錳酸鉀，碘，過氧化氫對抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用，其ID50濃度分別為1.9×10-3 mol/L，2.96×10-3mol/L,15.9×10-3 mol/L。
　　2.本文采用凝集反應(yīng)，測定血清中的IgM抗體活性，方法簡便。研究發(fā)現(xiàn)，高錳酸鉀，碘，過氧化氫對IgM抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用，其ID50濃度分別為2.58×10-3 mol/L,3.83×10-3 mol/L,22.3×10-3mol/L。

5、r>　　3.本文采用ELISA試劑盒測定乙型肝炎病毒表面抗體活性，較之沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)更加靈敏，定量分析，準(zhǔn)確性好。高錳酸鉀，碘，過氧化氫對抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用的ID50濃度分別為2.40×10-3mol/L，3.06×10-3mol/L，13.5×10-3mol/L。
　　4.在血清中加入ID50濃度的氧化劑之后，血清的總抗氧化能力沒有產(chǎn)生明顯變化。
　　5.本文中，通過HLA-GAPDH的PCR產(chǎn)物在瓊脂糖電泳凝膠

6、中的結(jié)果圖以及內(nèi)參CRP擴(kuò)增結(jié)果可以看出,隨著氧化劑濃度的加大，GAPDH的PCR產(chǎn)物電泳條帶和CRP擴(kuò)增條帶逐漸暗淡，達(dá)到一定濃度后，條帶消失。高錳酸鉀，碘，過氧化氫對DNA造成損傷的ID50濃度分別為0.625×10-3mol/L，1.25×10-3mol/L，6.25×10-3mol/L。
　　6.在凝血指標(biāo)的檢測中，發(fā)現(xiàn)隨著氧化劑濃度的加大，PT、APTT、TT值逐漸增大，而Fib值隨著氧化劑濃度的加大而逐漸減小。