氧化應激作用對抗原抗體結(jié)合活性影響的定量評估和比較觀察.pdf

1、目的:本文通過定量評估氧化劑對抗原抗體結(jié)合活性的影響，探討氧化應激對免疫系統(tǒng)的毒害作用，同時比較觀察氧化應激與DNA損傷、氧化應激與凝血功能變化等，進一步全面評價氧化應激的生物學效應，深入了解氧化應激對機體的影響。
　　方法:1.采用沉淀反應中的雙向擴散試驗，通過觀察瓊脂凝膠板中形成沉淀線的清晰程度，來表示高錳酸鉀，碘和過氧化氫三種氧化劑在該反應中對抗原抗體結(jié)合活性的影響。沉淀反應測定多克隆抗體，而不能測定單克隆抗體。
　　

2、2.采用健康人的B型紅細胞和O型血清，通過B型紅細胞表面的B抗原與O型血清中的抗B抗體發(fā)生凝集反應，用各氧化劑濃度對應下的凝集度求面積作為衡量該濃度的氧化劑對凝集反應抗體活性的反應強度的單位。凝集實驗主要測定IgM抗體。
　　3.采用酶免疫技術中的酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測乙型肝炎表面抗體，通過酶標儀測定OD值的大小來表示ELISA試驗中三種氧化劑對IgG抗體活性的影響。
　　4.采用氧化還原電位直接測定法評價血清的抗氧化能力，將

3、對抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用的ID50濃度的氧化劑加到血清中，測定此濃度下的氧化劑對血清總抗氧化力的影響。
　　5.本文選定聚合酶鏈式反應(PCR)，將其DNA模板氧化處理，通過觀察瓊脂電泳擴增條帶的清晰程度，進而分析氧化劑對DNA的損傷作用。
　　6.本文采用一次性負壓定量血凝管、全自動血凝分析儀及其配套凝血試劑，通過檢測經(jīng)過氧化劑處理后的血液標本的凝血四項指標，探討氧化劑對凝血功能的影響。
　　結(jié)果:1.本文中雙向擴

4、散試驗簡單易行，并發(fā)現(xiàn)高錳酸鉀，碘，過氧化氫對抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用，其ID50濃度分別為1.9×10-3 mol/L，2.96×10-3mol/L,15.9×10-3 mol/L。
　　2.本文采用凝集反應，測定血清中的IgM抗體活性，方法簡便。研究發(fā)現(xiàn)，高錳酸鉀，碘，過氧化氫對IgM抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用，其ID50濃度分別為2.58×10-3 mol/L,3.83×10-3 mol/L,22.3×10-3mol/L。

5、r>　　3.本文采用ELISA試劑盒測定乙型肝炎病毒表面抗體活性，較之沉淀反應和凝集反應更加靈敏，定量分析，準確性好。高錳酸鉀，碘，過氧化氫對抗體活性產(chǎn)生明顯抑制作用的ID50濃度分別為2.40×10-3mol/L，3.06×10-3mol/L，13.5×10-3mol/L。
　　4.在血清中加入ID50濃度的氧化劑之后，血清的總抗氧化能力沒有產(chǎn)生明顯變化。
　　5.本文中，通過HLA-GAPDH的PCR產(chǎn)物在瓊脂糖電泳凝膠

6、中的結(jié)果圖以及內(nèi)參CRP擴增結(jié)果可以看出,隨著氧化劑濃度的加大，GAPDH的PCR產(chǎn)物電泳條帶和CRP擴增條帶逐漸暗淡，達到一定濃度后，條帶消失。高錳酸鉀，碘，過氧化氫對DNA造成損傷的ID50濃度分別為0.625×10-3mol/L，1.25×10-3mol/L，6.25×10-3mol/L。
　　6.在凝血指標的檢測中，發(fā)現(xiàn)隨著氧化劑濃度的加大，PT、APTT、TT值逐漸增大，而Fib值隨著氧化劑濃度的加大而逐漸減小。