小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝硬化模型作用的研究.pdf

1、目的：肝硬化是各種肝臟炎癥性疾病發(fā)展的終末期階段，臨床診斷不能只考慮單一疾病的情況，需要對(duì)全身情況進(jìn)行綜合評(píng)估，發(fā)生肝硬化病變時(shí)，可能會(huì)伴隨其他并發(fā)癥的發(fā)生，肝硬化誘發(fā)的其他部位相關(guān)疾病是導(dǎo)致肝硬化死亡率增高的主要原因之一。從病理學(xué)角度對(duì)肝硬化進(jìn)行分析，肝臟組織的表面觀發(fā)生了明顯的改變，顯微鏡下觀察不到活性的肝臟細(xì)胞，視野下充滿大量的壞死細(xì)胞，出現(xiàn)肝硬化的典型結(jié)構(gòu)變化。肝硬化發(fā)生發(fā)展過程復(fù)雜，需要注意多種狀況的發(fā)生，比如腹腔積水、急性大

2、出血、黃疸，肝性腦病等，晚期肝功能檢查呈現(xiàn)明顯異常，病變持續(xù)進(jìn)展，最終因肝功能衰竭而告終。目前肝硬化的臨床診療尚無效果好的特效藥，并且對(duì)藥物的選擇性強(qiáng)，濫用藥物會(huì)加重肝臟處理負(fù)擔(dān)，延誤病情，因此需要尋找新的治療手段，提高肝硬化的治療效果。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells。BMSCs)作為肝細(xì)胞受到損傷時(shí)修復(fù)的主要來源，可對(duì)肝臟組織的功能進(jìn)行改善，并且，同其他肝硬化治療手段相比。BMS

3、Cs移植具有取材方便、無排斥反應(yīng)、安全性高及價(jià)格相對(duì)低廉等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)使用乳鼠的骨髓來培養(yǎng)BMSCs的原代細(xì)胞，以四氯化碳為主的方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行肝硬化的造模，然后，對(duì)其移植增值能力強(qiáng)的BMSCs，采取有效的手段對(duì)肝硬化恢復(fù)程度進(jìn)行檢測，分析最終的結(jié)果。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和基礎(chǔ)研究，為臨床的進(jìn)一步應(yīng)用提供更為確實(shí)的證據(jù)和有力的支持。
　　方法：解剖雄性乳鼠，提取骨髓，全骨髓貼壁方法培養(yǎng)BMSCs，原代細(xì)胞進(jìn)行消化傳代，獲取三代以內(nèi)的B

4、MSCs；在培養(yǎng)細(xì)胞表面標(biāo)記單克隆抗體CD11b、CD29、CD31、CD14、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105，流式細(xì)胞儀檢測；使用以四氯化碳為主，苯巴比妥鈉為輔的方法對(duì)BALB/C雄性小鼠進(jìn)行肝硬化的造模，普通飲食飲水進(jìn)行飼養(yǎng)的BALB/C雄性小鼠作為對(duì)照組，制備病理切片，兩者結(jié)果進(jìn)行比照參考；移植途徑可以采用兩種方式：肝動(dòng)脈和尾靜脈途徑，移植成功后，觀察實(shí)驗(yàn)組小鼠一段時(shí)間后，肉眼觀察肝臟組織，分析病理切片報(bào)告結(jié)果

5、，得到肝硬化的治療結(jié)果數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：獲得三代以內(nèi)、增值能力強(qiáng)和較為純化的BMSCs；以四氯化碳為主的方法對(duì)BALB/C雄性小鼠進(jìn)行肝硬化造模，病理結(jié)果顯示出肝硬化結(jié)果，造模成功；尾靜脈和肝動(dòng)脈途徑對(duì)肝硬化小鼠移植BMSCs，病理報(bào)告結(jié)果顯示肝硬化程度得到了一定程度的良好改善，兩種途徑治療效果相當(dāng)。
　　結(jié)論：流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果示CD105、CD73、CD29、CD90的陽性表達(dá)率≥95％，在培養(yǎng)細(xì)胞表面呈強(qiáng)陽性表達(dá)，CD

6、14、CD11b、CD34、CD45、CD31的陽性表達(dá)率≤2%，成陰性表達(dá)，說明培養(yǎng)的細(xì)胞符合BMSCs的基本特性，可以通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法對(duì)BMSCs進(jìn)行培養(yǎng)，原代細(xì)胞消化傳代獲得的三代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞，增殖能力強(qiáng)，細(xì)胞種類較為純化，可以進(jìn)行對(duì)疾病治療的移植。采用以四氯化碳為主方法對(duì)小鼠進(jìn)行肝硬化模型的建立，肝臟組織發(fā)生明顯的肝硬化改變，病理切片結(jié)果也符合，說明此法可對(duì)小鼠進(jìn)行肝硬化造模。肝動(dòng)脈和尾靜脈途徑移植一定細(xì)胞數(shù)量的BMSCs