大腸癌腫瘤微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過(guò)下調(diào)microRNA-195-5p靶向調(diào)控MAGE的表達(dá).pdf

1、已有大量的研究證據(jù)證明在惡性腫瘤微環(huán)境（TME）中M2型巨噬細(xì)胞的含量表現(xiàn)為明顯升高，在癌癥組織中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞被招募到腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的腫瘤間質(zhì)中來(lái)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，而腫瘤間質(zhì)正是構(gòu)成腫瘤微環(huán)境的主要組成成分。在這項(xiàng)研究中，我們側(cè)重于研究TME中免疫細(xì)胞中的M2巨噬細(xì)胞在結(jié)腸腫瘤間質(zhì)中作用于 microRNA-195-5p的這一過(guò)程。首先研究microRNA-195-5p以及其靶基因MAGE的作用機(jī)理，先建立一

2、個(gè)共培養(yǎng)體系使THP-1轉(zhuǎn)化為M2的巨噬細(xì)胞。方法是從培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞（LoVo細(xì)胞株）提取培養(yǎng)基上清液，用佛波酯（PMA，美國(guó)sigma公司產(chǎn)）和LoVo上清液一起刺激THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)化為M2型巨噬細(xì)胞；第二步驗(yàn)證轉(zhuǎn)化好的巨噬細(xì)胞表型，方法為：ELISA和流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定特定的細(xì)胞因子表達(dá)；第三步：提取M2巨噬細(xì)胞中miR-195-5p用RT-PCR和免疫印跡證實(shí)了 miR-195下調(diào)，同時(shí)它的靶蛋白 MAGE升高，接下來(lái)，transw

3、ell侵襲試驗(yàn)表明，LoVo細(xì)胞及巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)后上調(diào)和下調(diào)巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-195-5p，分別可以使LoVo細(xì)胞侵襲能力下降和上升。
　　結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前結(jié)腸癌的早期診斷仍然比較困難，多數(shù)患者診斷時(shí)己有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移?，F(xiàn)今腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤的影響成為新的研究熱點(diǎn)，而腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophage，TA

4、M)作為其中重要組成成分，在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用尤為突出。
　　腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞位于腫瘤間質(zhì)，它可以通過(guò)產(chǎn)生細(xì)胞因子或直接調(diào)控基因及靶蛋白作用于腫瘤細(xì)胞，從而改變惡性腫瘤的生長(zhǎng)、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性。既往研究中發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與大多數(shù)癌癥都密切相關(guān)，同時(shí)，它的浸潤(rùn)程度與這些腫瘤患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。本研究通過(guò)建立上述共培養(yǎng)體系并檢測(cè)微小RNA-195-5p的變化，探討腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌生物學(xué)行為的影響。