腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在丙泊酚致新生鼠認(rèn)知功能障礙中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、丙泊酚對(duì)新生大鼠海馬proBDNF/mBDNF表達(dá)比例的影響與學(xué)習(xí)記憶功能的關(guān)系
　　目的：通過(guò)向新生大鼠單次，多次注射丙泊酚，模擬單次與多次丙泊酚麻醉，探討丙泊酚麻醉引起新生大鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙是否與其海馬mBDNF及proBDNF蛋白表達(dá)比例失衡有關(guān)。
　　方法：108只新生7d健康清潔級(jí)SD大鼠，體質(zhì)量12～16g．雌雄各半，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：對(duì)照組(C組)、丙泊酚單次麻醉組(P1組)和丙泊酚多次麻醉

2、組(P2組)，每組36只。C組腹腔注射生理鹽水7.5ml/kg/d，連續(xù)7d；P1組腹腔注射生理鹽水7.5ml/kg/d，連續(xù)6d，第7天腹腔注射丙泊酚75mg/kg；P2組腹腔注射丙泊酚75mg/kg/d，連續(xù)7d。第7天各組大鼠分別注射完畢后間隔15min，每組隨機(jī)取6只新生大鼠，心室穿刺采血，測(cè)定血糖及血?dú)?；于注射完畢?h，24h，48h，72h每組隨機(jī)抽取6只大鼠，分離海馬組織。余下三組大鼠(n=6)喂養(yǎng)至出生第25天進(jìn)行Mo

3、rris水迷宮實(shí)驗(yàn)，測(cè)試空間學(xué)習(xí)記憶能力。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后（30d）取大鼠海馬組織。采用RT-PCR檢測(cè)BDNF mRNA的表達(dá)，western blot法檢測(cè)mBDNF，proBDNF蛋白的表達(dá)，并計(jì)算出proBDNF/mBDNF蛋白表達(dá)的比值。
　　結(jié)果：三組新生大鼠血?dú)夥治鼋Y(jié)果和血糖均在正常范圍內(nèi)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。C組大鼠海馬BDNF mRNA與mBDNF蛋白表達(dá)水平逐漸上調(diào)，proBDNF蛋白表達(dá)水平與p

4、roBDNF/mBDNF比值逐漸下調(diào)。與C組比較，P1組各時(shí)間點(diǎn)海馬BDNF mRNA及mBDNF蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），proBDNF/mBDNF比值升高（P＜0.05），大鼠幼年期逃逸潛伏期延長(zhǎng)，空間探索時(shí)間縮短（P＜0.05）；P2組各時(shí)間點(diǎn)海馬BDNF mRNA及mBDNF蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，proBDNF蛋白表達(dá)及proBDNF/mBDNF比值顯著升高（P＜0.05），大鼠幼年期逃逸潛伏期顯著延長(zhǎng)，空間探索時(shí)間明顯縮短（P

5、＜0.05）。
　　結(jié)論：丙泊酚單次麻醉可引起新生大鼠海馬BDNF mRNA與mBDNF蛋白表達(dá)下調(diào)，而proBDNF無(wú)顯著改變，proBDNF/mBDNF蛋白表達(dá)比值輕微上調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致大鼠幼年期逃逸潛伏期延長(zhǎng)，空間探索時(shí)間縮短；丙泊酚多次麻醉還可引起大鼠海馬proBDNF蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，proBDNF/mBDNF蛋白表達(dá)比值則進(jìn)一步升高，最終導(dǎo)致大鼠幼年期逃逸潛伏期明顯延長(zhǎng)，空間探索時(shí)間顯著縮短。
　　第二部分、mBDN

6、F/Akt/CREB和proBDNF/RhoA信號(hào)傳導(dǎo)失衡在丙泊酚致新生鼠認(rèn)知功能障礙中的作用
　　目的：探討mBDNF/Akt/CREB和proBDNF/RhoA信號(hào)傳導(dǎo)失衡在丙泊酚致新生鼠認(rèn)知功能障礙的作用。
　　方法：新生7d大鼠隨機(jī)分為6組(n=12)：C組連續(xù)7d腹腔注射生理鹽水；P1組注射生理鹽水6d后，第7天注射丙泊酚；P2組連續(xù)7d注射丙泊酚；T、K及D組連續(xù)7d注射丙泊酚后，第7天再分別注射P75NTR受體

7、抑制劑TAT-Pep5、TrkB受體抑制劑K252a與溶劑DMSO。各組隨機(jī)抽取6只大鼠進(jìn)行血糖血?dú)獾谋O(jiān)測(cè)，其余大鼠喂養(yǎng)至第25天進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，測(cè)試空間學(xué)習(xí)記憶能力。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取海馬組織，通過(guò)Western blot檢測(cè)mBDNF/Akt/CREB及proBDNF/RhoA信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：六組新生大鼠血?dú)夥治鼋Y(jié)果各指標(biāo)和血糖均在正常范圍內(nèi)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與C組比較，P1組與

8、P2組大鼠幼年期逃逸潛伏期延長(zhǎng)，空間探索時(shí)間縮短（P＜0.05），且P2組改變更為顯著。與溶劑對(duì)照組（D組）比較，TrkB受體抑制劑組（K組）大鼠幼年期逃逸潛伏期延長(zhǎng)，空間探索時(shí)間縮短(P＜0.05)；P75NTR受體抑制劑組（T組）大鼠幼年期逃逸潛伏期縮短，空間探索時(shí)間延長(zhǎng)(P＜0.05)。與C組比較，P1組與P2組海馬mBDNF/Akt/CREB表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），且P2組下調(diào)更為顯著；P1組與P2組海馬proBDNF/ Rh