透腦屏障的模擬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子融合多肽的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是一種臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶認(rèn)知功能障礙的神經(jīng)退行性疾病,是最常見(jiàn)的老年期癡呆,且患病率日趨上升,給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。由于其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,目前尚無(wú)特效藥。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)是一類對(duì)多種神經(jīng)元均有保護(hù)作用的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,可通過(guò)激活TrkB受體及其下游Erk1/2和Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)神

2、經(jīng)元的存活、增殖分化和損傷修復(fù)。由于BDNF分子量大不能透過(guò)血腦屏障和藥物半衰期較短等因素,大大制約了BDNF的臨床應(yīng)用。因此,我們?cè)诒狙芯恐袘?yīng)用具有穿透生物膜作用的TAT肽和模擬BDNF的核心片段組成一段融合多肽。
　　目的:研究由TAT肽和模擬BDNF的核心片段組成的融合多肽是否具有神經(jīng)保護(hù)和促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力,并探討其作用機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)首先用EGFP標(biāo)記TAT,檢測(cè)其透過(guò)血腦屏障的能力。然后分別在東莨菪堿所致癡

3、呆的大鼠模型和APP轉(zhuǎn)基因小鼠模型中外周給予融合多肽,用水迷宮檢測(cè)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力改變,通過(guò)免疫印跡和免疫組化測(cè)定突觸相關(guān)蛋白的表達(dá),并根據(jù)模型動(dòng)物的特征分別檢測(cè)了膽堿能相關(guān)的酶的活性(AChE、ChAT)和Aβ的水平,為探討機(jī)制我們進(jìn)一步檢測(cè)了TrkB受體和下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Erk1/2、Akt及其磷酸化水平,同時(shí)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子和即早基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)(1)TAT具有攜帶大分子物質(zhì)穿透血腦屏障的能力。(2)融合多肽能

4、逆轉(zhuǎn)由東莨菪堿所導(dǎo)致的大鼠癡呆,促進(jìn)突觸素和M受體的表達(dá)并降低AChE的活性,其機(jī)制為融合多肽激活TrkB受體,促進(jìn)下游Erk1/2、Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及轉(zhuǎn)錄因子CREB的活化。(3)融合多肽改善APP轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙,減少Aβ的水平和tau蛋白的過(guò)度磷酸化,增加突觸相關(guān)蛋白PSD93、PSD95的表達(dá),其作用機(jī)制為融合多肽激活TrkB受體,啟動(dòng)下游Erk1/2、Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路降低BACE1、PS1以及GSK-3β活性