膽囊癌危險(xiǎn)因素再探討及幽門(mén)螺桿菌和雌激素促進(jìn)膽道上皮異常增殖的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文第I頁(yè)申請(qǐng)上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文膽囊癌危險(xiǎn)因素再探討及幽門(mén)螺桿菌和雌激素促進(jìn)膽道膽囊癌危險(xiǎn)因素再探討及幽門(mén)螺桿菌和雌激素促進(jìn)膽道上皮異常增殖的研究上皮異常增殖的研究學(xué)校：上海交通大學(xué)院系：醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院班級(jí)：2013級(jí)博士班姓名：周迪學(xué)號(hào)：0137229233專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)（普外科）研究方向：膽道惡性腫瘤的診療導(dǎo)師：全志偉教授資助基金：國(guó)家自然基金青年基金項(xiàng)目ERβNrf2在幽門(mén)螺桿菌誘發(fā)膽道上皮惡性轉(zhuǎn)化中的

2、作用機(jī)制研究上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院2016年4月上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文第III頁(yè)摘要目的目的第一部分探討膽囊癌的危險(xiǎn)因素并建立用于早期診斷的列線圖。對(duì)于雌激素和H.pyli兩個(gè)潛在危險(xiǎn)因素，第二部分研究將兩者作用于膽道上皮細(xì)胞HIBEC后對(duì)其增殖、凋亡、遷移能力以及氧化性DNA損傷的影響。第三部分探討兩者對(duì)氧化應(yīng)激相關(guān)通路Nrf2ARE以及凋亡通路的影響。方法方法第一部分回顧性研究III期膽囊癌患者的臨床資料進(jìn)行單因素和Log

3、istic回歸分析，在此基礎(chǔ)上建立列線圖。其預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性分別經(jīng)內(nèi)驗(yàn)證以及外驗(yàn)證，并做出校正曲線。第二部分中，將17β雌二醇（109molL）以及H.pyli（MOI=1:1）作用于HIBEC細(xì)胞并反復(fù)傳代至15代后，進(jìn)行：（1）CCK8、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)Ki67的表達(dá)水平以及平板克隆實(shí)驗(yàn)探究細(xì)胞增殖能力；（2）AnnexinVPI檢測(cè)凋亡水平；（3）Transwell檢測(cè)遷移能力；（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ROS的表達(dá)水平，熒光染色觀察8OHd

4、G的表達(dá)，評(píng)價(jià)氧化性DNA損傷情況。第三部分中，（1）PCR以及Westernblot檢測(cè)Nrf2、Keap1、NQO1、HO1的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；（2）免疫熒光雙染以及Westernblot檢測(cè)細(xì)胞核與胞漿中Nrf2蛋白的表達(dá)水平，探究Nrf2是否轉(zhuǎn)位入核；（3）CoIP檢測(cè)Nrf2與Keap1的相互作用；（4）EMSA檢測(cè)Nrf2是否與NQO1的DNA結(jié)合；（5）Westernblot檢測(cè)凋亡通路中關(guān)鍵蛋白酶的表達(dá)水平。結(jié)果結(jié)果第一部

5、分中，納入構(gòu)建列線圖的相關(guān)因素包括年齡、危險(xiǎn)飲酒、確診的膽石癥病程、影像學(xué)診斷提示膽囊萎縮、膽囊壁鈣化、息肉樣增生、膽囊壁厚窄比和粘膜線中斷。內(nèi)、外驗(yàn)證均得到較高的一致性指數(shù)Cindex（0.889和0.856）。第二及第三部分中發(fā)現(xiàn)：H.pyli以及17β雌二醇可單獨(dú)或協(xié)同促進(jìn)HIBEC細(xì)胞：OD450值、Ki67表達(dá)水平以及克隆形成率均顯著升高（p0.05），凋亡率降低（p=0.011以及0.005），穿膜細(xì)胞數(shù)顯著增加（p=0.0