碘乙酸鈉誘發(fā)膝骨關(guān)節(jié)炎軸漿運(yùn)輸障礙性神經(jīng)痛發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、【目的】
　　骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis, OA)是一種常見的以進(jìn)行性關(guān)節(jié)軟骨退行性變和繼發(fā)性骨質(zhì)增生為特征的慢性骨關(guān)節(jié)疾病。慢性疼痛是骨關(guān)節(jié)炎最主要的癥狀也是導(dǎo)致患肢功能喪失的主要原因。近年來研究發(fā)現(xiàn)，感覺神經(jīng)病理性損傷是骨關(guān)節(jié)炎慢性疼痛的重要病因，但對于骨關(guān)節(jié)退行性病變?nèi)绾握T發(fā)感覺神經(jīng)損傷性疼痛的病理生理機(jī)制尚不清楚。MIA膝骨關(guān)節(jié)炎是目前公認(rèn)并廣泛使用的骨關(guān)節(jié)炎動物模型。因此，本論文的研究目的旨在建立碘乙酸鈉(M

2、onosodium Iodoacetate，MIA)誘發(fā)的大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎動物模型以及應(yīng)用該模型對膝骨關(guān)節(jié)炎感覺神經(jīng)損傷的病理生理機(jī)制進(jìn)行研究。
　　【方法】
　　背根神經(jīng)節(jié)(DRG)痛覺神經(jīng)元主要由植物凝集素B4(Isolectin B4, IB4)以及降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene related peptide, CGRP)標(biāo)記陽性的小細(xì)胞感覺神經(jīng)元組成，其中結(jié)合IB4者為非肽能神經(jīng)元而表達(dá)CGRP者為

3、肽能神經(jīng)元，兩種細(xì)胞的中樞軸突分別均勻投射到兩側(cè)脊髓背角深層及淺層，與脊髓背角第二級感覺神經(jīng)元形成突觸塑型連接。因此，IB4和 CGRP標(biāo)記陽性軸突在脊髓背角分布變化是反映 DRG痛覺神經(jīng)元中樞塑型的重要標(biāo)志之一。應(yīng)用免疫熒光標(biāo)記組織化學(xué)技術(shù)，我們對 MIA膝骨關(guān)節(jié)炎神經(jīng)性疼痛是否存在 DRG痛覺神經(jīng)元中樞軸突脊髓背角分布異常進(jìn)行了研究。膝骨關(guān)節(jié)炎通過大鼠單側(cè)后肢膝關(guān)節(jié)腔注射2mg碘乙酸鈉而誘發(fā)，相關(guān)疼痛行為測試包括機(jī)械性刺激即針刺和觸

4、覺測量(von Frey)，熱刺激，冷刺激，以及患肢負(fù)重測試。在膝骨關(guān)節(jié)炎誘發(fā)后第5周，收集腰（L）脊髓段，患側(cè)以及對側(cè)第L3、L4和L5 DRG進(jìn)行IB4和CGRP免疫熒光組織化學(xué)標(biāo)記檢測，用以同相比較DRG痛覺神經(jīng)元軸突在脊髓背角中樞塑型與細(xì)胞體變化的相關(guān)性。
　　【結(jié)果】
　　MIA注射大鼠均表現(xiàn)有明顯的持續(xù)性疼痛行為以及患肢負(fù)重障礙。與注射生理鹽水的陰性對照組相比，MIA注射大鼠患側(cè)脊髓背角深層 IB4熒光標(biāo)記比對側(cè)

5、降低35±4％（p<0.001，n=每組5例動物4，CGRP熒光標(biāo)記降低15±3%（p<0.01，n=每組5只大鼠)。與上述變化相反，在DRG水平，MIA大鼠患側(cè)L5 DRG中IB4標(biāo)記陽性感覺神經(jīng)元百分比為61±6%，明顯高于對照組大鼠47±1%(n=每組5只大鼠，p<0.01)，而 L3和 L4 DRG的IB4陽性神經(jīng)元的比例在兩組之間沒有顯著變化。L3, L4和L5 DRG CGRP免疫標(biāo)記陽性感覺神經(jīng)元百分比在兩組大鼠中均無顯著

6、差異。鈣調(diào)素依賴蛋白激酶II(CaMKII)和酪氨酸激酶A(TrkA)分別是非肽能神經(jīng)元（IB4陽性）和肽能神經(jīng)元（CGRP陽性）標(biāo)志蛋白之一。免疫熒光標(biāo)記結(jié)果顯示脊髓背角CaMKII和TrkA與IB4和CGRP熒光密度呈相同變化，即MIA大鼠患側(cè)脊髓背角 CaMKII和 TrkA初級神經(jīng)元的突觸前纖維與對側(cè)以及對照組相比明顯降低，但二者在DRG中與對照組相比則沒有顯著變化。
　　【結(jié)論】
　　MIA誘發(fā)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎慢性疼