阿爾茲海默病細(xì)胞模型中DNA去甲基化對(duì)Nrf2表達(dá)及活性的影響.pdf

1、核因子E2相關(guān)因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2， Nrf2）是重要的抗氧化應(yīng)激核轉(zhuǎn)錄因子。越來(lái)越多的研究證據(jù)表明氧化應(yīng)激在阿爾茲海默?。ˋlzheimer’s disease, AD）的發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。一些關(guān)于A(yíng)D的動(dòng)物和臨床研究發(fā)現(xiàn)，AD腦內(nèi)Nrf2的表達(dá)降低，但其潛在機(jī)制尚不明確。本研究以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Swedish家族突變的人APP695的小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤N2a/APPs

2、we細(xì)胞作為AD的細(xì)胞模型，予以DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase，Dnmts）抑制劑5-氮雜-2-脫氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-Aza）處理，采用亞硫酸氫鹽測(cè)序聚合酶鏈反應(yīng)法（Bisulfite-sequencing PCR，BSP）檢測(cè)5-Aza處理前后細(xì)胞中Nrf2基因啟動(dòng)子區(qū)DNA的甲基化水平；Q-PCR檢測(cè)細(xì)胞中Nrf2，NQO1的mRNA表達(dá)水平，Western bl

3、ot檢測(cè)細(xì)胞中Dnmts，總Nrf2，核內(nèi)Nrf2，NQO1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平；免疫熒光法檢測(cè)5-Aza處理前后Nrf2在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。結(jié)果顯示：①.5-Aza處理后能有效上調(diào)N2a/APPswe細(xì)胞中Nrf2的mRNA和蛋白水平；②.5μM的5-Aza處理后N2a/APPswe細(xì)胞中Nrf2啟動(dòng)子區(qū)DNA發(fā)生去甲基化；③.5-Aza能夠抑制N2a/APPswe細(xì)胞中Dnmts的表達(dá)；④.5-Aza能促進(jìn)Nrf2的核轉(zhuǎn)位，上調(diào)Nrf2