基于功能化介孔二氧化硅載體的漆酶固定化研究.pdf

1、酶在許多領(lǐng)域已得到應(yīng)用，但游離酶容易受環(huán)境影響失去活性，而固定化酶比較穩(wěn)定，對(duì)抑制劑敏感性低，可以重復(fù)使用。
　　本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)制備介孔二氧化硅載體，并對(duì)其進(jìn)行表面修飾得到官能化介孔二氧化硅載體，并以上述載體對(duì)漆酶進(jìn)行固定化。研究不同的官能團(tuán)（氨基和乙烯基）和不同固定化方法（交聯(lián)吸附法和吸附法）對(duì)漆酶固定化的影響。通過(guò)考察漆酶的固定量來(lái)討論不同官能團(tuán)對(duì)漆酶固定化的影響;通過(guò)測(cè)試固定化漆酶的酶活及其酶活回收率，探討不同方法對(duì)固定漆酶

2、的影響。最后研究固定化漆酶的性質(zhì)，并與游離漆酶的性質(zhì)進(jìn)行對(duì)比分析。
　　(1)游離白腐真菌漆酶活性測(cè)試條件優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，測(cè)定酶活的最適合條件為:波長(zhǎng)600nm、pH值4.0、反應(yīng)溫度30℃、緩沖溶液的濃度0.1mol/L。動(dòng)力學(xué)曲線:反應(yīng)1-5min內(nèi)，反應(yīng)符合線性方程y=0.0097x-0.0016;隨時(shí)間增加，反應(yīng)速率增加趨勢(shì)減小，16min反應(yīng)終止。
　　(2)官能團(tuán)對(duì)漆酶吸附法固定化影響研究。研究發(fā)現(xiàn)，SBA-

3、15的載酶量是300.2mg/g，SBA-15-NH2的載酶量是176.8mg/g，SBA-15-CH=CH2的載酶量是51.6mg/g。由此可見，官能團(tuán)的引入降低了吸附法固定化漆酶的載酶量，尤其是乙烯基影響顯著。
　　(3)吸附法和交聯(lián)吸附法漆酶固定化的影響因素研究。在吸附法固定漆酶的最優(yōu)條件下（固定時(shí)間5h、最適合漆酶濃度0.5mg/mL、最適合反應(yīng)pH5）固定漆酶的酶活是3005U/g，酶活力回收率為60.1％;在交聯(lián)吸附固

4、定漆酶的最優(yōu)條件下（交聯(lián)時(shí)間7h、固定化時(shí)間7h、酶濃度1.5mg/mL、戊二醛濃度6％）固定化漆酶的酶活是3615U/g，酶活力回收率是72.3％。由此可見，交聯(lián)吸附法優(yōu)于吸附法。
　　(4)固定化漆酶（SBA-15-NH2為載體）與游離漆酶的性質(zhì)對(duì)比分析。固定化漆酶最適溫度是50℃，游離漆酶最適溫度是30℃;固定化漆酶最適pH為4.5，游離漆酶最適pH為4;儲(chǔ)存20天后酶活力:吸附法固定漆酶活力為初始69％;交聯(lián)吸附法活力為初